人呼吸道合胞病毒复制缺陷型活疫苗与减毒活疫苗：免疫原性及安全性的比较研究

Human respiratory syncytial virus (RSV) is one of the most important pathogens causing lower respiratory tract infection in infants and the elderly. No vaccine is available until now. Although RSV live-attenuated vaccines, developed by NIH and MedImmune Company based on the technique of reverse genetics, are considered to be the most promising candidate vaccines for neonates, there are still some challenges ahead such as immunogenicity loss and the risk of reverse mutation. The development of both safe and immunogenic enough vaccine is definitely the optimal choice. Therefore, combining the latest progress in RNA virus vaccine research achieved by Prof. Zhou Demin in Beijing University with our successful research experiences on live-attenuated RSV vaccines, we plan to use orthogonal translation system to prepare new replication-deficient RSV virus and compare it with the constructed RSV attenuated live vaccine in our lab on its characteristics biologically in vitro, then on the induced immune effect in BALB/c mice following a single intranasal immunization, and protective role and the potential immunopathogenesis against RSV challenge in the vaccinated BALB/c mice. These works are of great importance and will pave the way for the exploration of a safe, reliable, independent intellectual property rights of RSV vaccine, and provide useful reference for the development of other RNA virus vaccines.

人呼吸道合胞病毒（RSV）是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的重要病原，还没有合格的疫苗，其疫苗研制为WHO最优先发展的疫苗之一。目前，NIH等研发的RSV减毒活疫苗被认为是最有希望用于新生儿预防的RSV候选疫苗，在免疫原性及安全性上仍存在不足。获得安全可靠和较好免疫原性的疫苗尚无成功的解决方案。为此，结合我国RNA活病毒疫苗研究的最新进展及我们课题组RSV减毒活疫苗的研究基础，拟利用正交翻译系统制备新型复制缺陷型RSV活病毒，并与本实验室成功构建的重组RSV减毒株进行比较研究，细胞水平明确遗传稳定性和减毒程度等生物学特征，经滴鼻途径感染/免疫BALB/c小鼠，评价体内减毒效果和体液、黏膜及细胞免疫效果，以及对RSV感染的保护作用和免疫病理损伤等。积极探讨提高RSV疫苗安全性和免疫原性的有效途径，将为获得安全可靠、具有自主知识产权的RSV疫苗提供重要基础，为其他RNA病毒疫苗的研究提供借鉴。

人呼吸道合胞病毒（RSV）是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的重要的病毒病原，目前还没有合格的疫苗获批临床应用。RSV减毒活疫苗被认为是最有希望用于新生儿预防的RSV候选疫苗，但在免疫原性及安全性上仍存在不足，获得安全可靠和免疫原性较好RSV减毒活疫苗是目前重要的研究方向。我们在本课题组RSV减毒活疫苗研究的基础上，尝试制备基于琥珀密码子突变的复制缺陷型RSV重组病毒，并应用多种减毒策略构建以RSV Long株为骨架的重组RSV减毒株，在细胞水平和小鼠体内系统开展遗传稳定性、减毒表型和免疫原性等比较研究。需要指出的是，虽然筛选及构建了携带TAG突变的RSV反基因组感染性cDNA质粒，但经多次努力难以拯救出可在包装细胞扩增的复制缺陷型重组RSV病毒。而采取引入cpts减毒突变及缺失SH、M2-2基因等策略构建及拯救重组RSV病毒的研究进展顺利，在细胞水平和小鼠体内对重组RSV病毒的遗传型和表型特征的分析结果与预期一致，结果显示源于RSV A2亚型的cpts和ΔSH等减毒突变和基因缺失在同为A亚型的RSVLong株上具有相同的减毒表型，不同的减毒突变及其组合在减毒表型上存在一定差异。制备的重组RSV病毒经滴鼻途径免疫BALB/c小鼠，均能诱导产生RSV特异性血清抗体和中和抗体，引发Th1偏向的免疫反应，抵抗病毒感染，没有出现疾病增强作用（enhanced respiratory disease, ERD）。我们发现删除M2-2会提高重组RSV中和抗原F和G蛋白的基因转录水平，该减毒株在Vero细胞中仍然可以获得较高的复制滴度，后续将在小鼠模型进一步开展安全性和免疫原性研究。本课题的研究结果为获得安全有效、具有自主知识产权的RSV疫苗提供了重要基础。