基于small RNA-seq的针灸治疗桥本甲状腺炎的免疫调控机制研究

The previous study indicated that the treatment of Hashimoto's thyroiditis (HT) has a good clinical effect, but in the present studies of China, the mechanism of moxibustion treatment of Hashimoto's thyroiditis has not been carried out from animal experiments. Therefore, based on the previous researches, combined with the small RNA-Seq technology and miRNA plays an important role in immune homeostasis of Hashimoto's thyroiditis, it intend to confirm from the clinical and animal studies, regard the immune regulation of miRNA and Th17cells as the breakthrough points, to screen and explore the differently expressed miRNAs and Th17cells which are involved in the development of HT by high-throughput sequencing, cell transfection and other molecular biology techniques and bioinformatics analysis methods. To explore the role and function of the differently expressed miRNAs in HT thyroid tissues and the role of moxibustion in the treatment of Hashimoto's thyroiditis by analyzing the Gene Ontology function and KEGG pathways of the miRNA target genes, to explain the moxibustion intervention mechanism through analyzing the relationship between the differently expressed miRNAs and Th17 cells immune factors, to improve the efficacy of HT by moxibustion treatment and provide experimental data and scientific basis.

课题组前期研究表明艾灸治疗桥本甲状腺炎（HT）有较好的临床疗效，但国内尚未见从动物实验方面开展艾灸治疗桥本甲状腺炎的作用机理研究。为此，本课题在前期研究的基础上，结合small RNA-Seq，miRNA在桥本甲状腺炎免疫稳态方面的重要作用，拟从临床试验与动物实验研究两个方面开展研究，以miRNA和Th17细胞参与/介导HT的免疫调节机制为切入点，采用高通量测序、细胞转染等分子生物学技术与生物信息学分析的方法，筛选HT甲状腺组织中差异表达的miRNAs，从miRNA靶基因的GO功能和KEGG通路等分析，拟探讨差异表达miRNAs在HT甲状腺组织中的作用和功能，以及miRNA在艾灸治疗桥本甲状腺炎的免疫调节中的作用，分析差异表达的miRNAs和Th17细胞免疫因子相关性以阐释艾灸干预的调控机制，以达到提高艾灸治疗HT的疗效之目的，为临床上艾灸治疗桥本甲状腺炎提供实验资料和科学依据。

背景：课题组前期研究表明艾灸治疗桥本甲状腺炎（HT）有较好的临床疗效，但国内尚未见从动物实验方面开展艾灸治疗桥本甲状腺炎的作用机理研究。本研究拟从miRNA表达的角度入手，从动物实验和临床研究两方面探讨艾灸治疗HT的作用机制。.主要研究内容及重要结果：动物实验：开展了艾灸对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的大体情况观察和EAT大鼠甲状腺组织miRNA表达谱的测序及生物信息学分析，并进行了细胞转染实验，从在体和离体多角度阐释艾灸干预桥本甲状腺炎的效应机制，对差异表达的miRNAs和免疫相关因子的表达进行了相关性分析。证实了①隔药饼灸能有效改善EAT大鼠甲状腺组织形态和EAT大鼠甲状腺功能，隔药饼灸能升高EAT大鼠FT3水平、降低TSH水平，降低EAT大鼠TGAb、TPOAb水平，有效治疗EAT。②隔药饼灸能影响EAT大鼠甲状腺组织miRNA表达谱，差异表达miRNAs的一些靶基因及其涉及的Toll-like receptor信号通路等与免疫密切相关，可能是隔药饼灸减轻EAT甲状腺炎症反应的效应机制之一。③隔药饼灸可显著升高HT患者血浆中miR-155-5p，miR-20a-3p，miR-346，miR-331-5p的表达，经转染后miR-155-5p，miR-20a-3p，miR-346的表达在293T细胞中的表达量显著升高。④隔药饼灸可降低EAT大鼠炎性细胞因子IL-17、IL-23、IL-23R蛋白含量及mRNA的表达水平，减轻甲状腺组织的炎症反应。临床观察：共纳入65名HT患者，其中隔药饼灸组32例，对照组33例，完成了临床疗效观察和指标检测，证实了①隔附子饼灸能有效改善HT患者的中医临床症状；②隔附子饼灸能改善HT患者的焦虑、抑郁情绪；③隔附子饼灸改善HT患者的中医临床症状和焦虑、抑郁情绪均优于对照组。.科学意义：本研究挖掘出EAT大鼠差异表达的miRNAs及其与免疫相关的信号通路，证实了艾灸可调节HT患者血浆和293T细胞中相关miRNAs的表达，进一步验证了HT的发生与免疫因子IL-17、IL-23、IL-23R的相关性。并通过临床观察进一步证实了艾灸可改善HT患者的中医临床症状及焦虑、抑郁情绪。本研究从在体和离体多角度阐释艾灸干预桥本甲状腺炎的效应机制，为临床上艾灸治疗桥本甲状腺炎提供了一定的实验资料和科学依据。