原发性干燥综合征中Lnc-IRF2-3对浆细胞样树突状细胞I型IFN系统的调控作用及其在发病中的作用研究

Primary Sjogren's syndrome(pSS) is an incurable autoimmune disease characterized by exocrine lymphocyte infiltration, and the pathogenesis is not clear. Type I interferon ( IFN ) signal system disorder is one of the key factors in the development of pSS, but the mechanism remains to be studied. Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are type I IFN producing cells, and play an important role in the course of pSS. Previous studies have shown that pDCs in pSS patients have a unique lncRNA profile, in which the expression of Lnc-IRF2-3 is significantly increased. Lnc-IRF2-3 has a closely association with pDCs type I IFN signaling pathway. Therefore, this project intends to take advantage of bioinformatics, RNA immunoprecipitation, shRNA interference and other means to solve several important scientific problems: 1.the affect of Lnc-IRF2-3 on pDCs' function;2.the mechanism of action for Lnc-IRF2-3 on pDC type I IFN signaling pathway;3.the expression and regulation mechanisms of Lnc-IRF2-3 in pDC;4.using an SS mice model to explore the possibility of regulating Lnc-IRF2-3 for the treatment and prevention of pSS. Through the above research ,it will help us to elucidate the regulation mechanism of Lnc-IRF2-3 on type I IFN pathway, and provide a theoretical basis to explore new ways of pSS immune intervention.

原发性干燥综合征(pSS)是一种以外分泌腺体淋巴细胞浸润为特征的自身免疫性疾病。I型干扰素(IFN)信号系统失调是pSS发病的关键因素之一，但其失调的机制尚未明确。浆细胞样树突状细胞(pDCs)是I型IFN的主要产生细胞，在pSS病程中发挥重要作用。前期研究表明，pSS患者来源pDCs具有独特的lncRNA表达谱，其中Lnc-IRF2-3表达显著增高，且与pDCs的I型IFN信号系统通路存在密切关联。因此，本课题拟利用RNA免疫共沉淀、shRNA 干扰等手段，解决以下重要科学问题：1.Lnc-IRF2-3对pDCs功能的影响，2.其对pDCs I型IFN系统的调节作用，3.其表达调控机制，4.利用SS动物模型，探讨调节Lnc-IRF2-3以治疗和预防pSS的可能性。通过以上研究有助于阐明pSS中Lnc-IRF2-3对I型IFN系统的调节机制，为探讨免疫干预治疗pSS的新途径提供理论依据。

本项目前期研究发现Lnc-IRF2-3在pSS患者pDCs中表达显著增高，且与疾病存在相关性；pSS患者pDCs中Lnc-IRF2-3表达量与Imida、CpG刺激后其分泌IFN-α量正相关。我们通过细胞实验发现，Imida较CpG刺激对Lnc-IRF2-3抑制或过表达pDCs细胞功能影响显著。Imida刺激下，Lnc-IRF2-3过表达组pDCs表达IFN-α、TLR7、TRAF3、TBK1等I型干扰素相关分子能力亢进，IRF2表达显著减少，而Lnc-IRF2-3抑制组pDCs表达IFN-α、IL-6降低；与Lnc-IRF2-3过表达pDCs共培养时T细胞增殖比对照组显著增强，且分泌IFN-r增高，与Lnc-IRF2-3抑制组 pDCs共培养的T细胞较对照组增殖减低且分泌IL-10显著减少。. 我们在pDC细胞中分别转染LV-lnc-IRF2-3，经Imida刺激后24小时后，分别用PCR检测和WB检测发现IRF2 mRNA及蛋白表达均较对照组表达显著降低。为了证明IRF2 蛋白和lnc-IRF2-3存在相互作用。我们分别通过RNA-pulldown技术和RIP实验证明了pSS患者pDC细胞内Lnc -IRF2-3与IRF2蛋白存在相互作用。.为了研究SS患者lnc-IRF2-3表达增高的调节机制。我们通过甲基化特异性PCR(MSP) 法检测16例pSS患者和16例健康志愿者外周血PBMC中lnc-IRF2-3启动子区甲基化状态，结果发现SS患者LNC-IRF2-3启动子区甲基化频率约高于健康对照组3倍。我们发现高表达LNC-IRF2-3的pSS患者的pDC细胞经DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc处理后，LNC-IRF2-3启动子区去甲基化，且LNC-IRF2-3的表达显著减低。说明LNC-IRF2-3启动子区CpG岛的异常高甲基化可能是导致lncRNA LNC-IRF2-3在SS患者pDC细胞中高表达的重要机制。. 通过SS模型小鼠体内实验发现，过表达lncRNA IRF2-3可以通过调节IRF2和I型干扰素等表达加剧小鼠SS下颌下腺组织淋巴细胞的浸润，进而加速SS病程。. 本研究初步阐明了lncRNA IRF2-3通过调控pDC细胞在SS发病机制中发挥作用，为进一步深入理解pSS的发病机理提供了新的思路。