中药肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠铜转运通路的分子调控机制研究

Wilson病(WD)是可治性铜代谢障碍性神经遗传病，但以金属络合剂为主的治疗方法因毒副反应使许多患者不能耐受，严重影响本病患者的病情和预后。上世纪70年代以来，本项目单位创用清热解毒、通腑利湿治法以中药肝豆汤治疗WD患者获得良好疗效。虽然我们发现肝豆汤有显著的细胞内排铜作用，但其产生疗效的确切机制尚不明确。.本项目基于30余年来我们在WD的研究基础，根据中医整体观念并结合现代医学的最新进展，假设肝豆汤具有多靶点、多环节调控WD异常铜转运通路的作用，拟采用Real-time PCR、West blot和激光扫描共聚焦显微镜等技术观察肝豆汤对WD模型-TX小鼠铜转运通路相关蛋白的调控作用，在分子水平揭示肝豆汤的疗效机理。.由于肝豆汤为中医药治疗神经遗传病提供了成功范例，因此，实施本项目不但为制定疗效好、副反应少的WD治疗方案提供理论依据，还可为中医药防治其它神经遗传变性疾病提供新的治法思路。

Wilson病(WD)是可治性铜代谢障碍性神经遗传病，但以金属络合剂为主的治疗方法因毒副反应使许多患者不能耐受，严重影响本病患者病情和预后。我们在前期研究中创用清热解毒、通腑利湿治法以中药肝豆汤治疗WD患者获得良好疗效。虽然我们发现肝豆汤有显著的细胞内排铜作用，但其产生疗效的确切机制尚不明确。.本项目基于30余年来我们在WD的研究基础，假设肝豆汤具有多靶点、多环节调控WD异常铜转运通路的作用，采用West blot和LSCM等技术观察肝豆汤对WD模型-TX小鼠铜转运通路相关蛋白的调控作用，尝试在分子水平揭示肝豆汤的疗效机理。.研究结果显示：1)肝豆汤可使TX小鼠肝组织内铜和铁的含量降低，并使锌的含量升高，表明肝豆汤能减轻TX小鼠肝细胞的铜负荷，并在一定程度上纠正铁代谢的异常；2)肝豆汤可延缓TX小鼠肝组织铜负荷引起的病理损害；3)肝豆汤可下调TX小鼠脑、肝组织内CTR1、MT的表达水平，并可上调TX小鼠脑、肝组织内CCS和肝组织内铜转运蛋白ATP7B的表达水平，表明肝豆汤可通过调控铜代谢通路的上述分子靶点，减少TX小鼠肝、脑细胞铜的摄入、促进铜从胆汁排出，使TX小鼠肝、脑组织内铜的含量降低，具有减轻肝、脑细胞的铜负荷、维护肝、脑细胞内铜稳态平衡的疗效；4)肝豆汤可下调TX小鼠脑、肝组织内ATOX1的表达水平，表明肝豆汤可降低TX小鼠脑、肝组织内由铜负荷造成的氧化应激水平，对脑、肝细胞具有保护作用。.研究结果还显示：1)DL小鼠ATP7B蛋白和TGN38的绿色荧光区域和红色荧光区域在合并后基本重合，表明未发生突变的ATP7B蛋白在肝细胞内定位于TGN38；2)TX小鼠ATP7B蛋白和TGN38的绿色荧光区域和红色荧光区域在合并后不能重合，表明发生突变的ATP7B蛋白在在肝细胞内发生了TGN38的定位障碍；3)肝豆汤兔血清培养的TX小鼠ATP7B蛋白和TGN38的绿色荧光区域和红色荧光区域在合并后部分发生了重合(其重合性不如DL小鼠)，表明肝豆汤通过调控铜代谢通路的上述分子靶点，使TX小鼠肝细胞内突变的ATP7B蛋白重新定位于TGN38，从而发挥其细胞内排铜作用，因而具有减轻肝细胞的铜负荷、维护肝细胞内铜稳态平衡的疗效。.本研究初步揭示了肝豆汤疗效的分子机制，为制定疗效好、副反应少的WD治疗方案提供了理论依据，并为中医药防治其它神经遗传变性疾病提供新的治法思路。