胶质细胞中TRAF6对趋化因子产生的影响及在神经病理性疼痛中的作用

神经病理性疼痛是临床上难治的疼痛，目前尚无有效的治疗药物。近年来的研究提示，脊髓背角内炎症前细胞因子如TNF-α、IL-1β等介导的炎症反应在神经病理性疼痛中起重要作用。TRAF6（TNF受体相关因子6）是TNF-α和 IL-1β激活后的下游连接蛋白，通过进一步激活下游信号通路而参与多种生理和病理反应。TRAF6在胞内信号通路中的关键位置使它很可能在慢性疼痛中有重要作用。本项目将在已有研究的基础上，采用腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼痛模型，从离体和整体水平，应用行为学、形态学、分子生物学和药理学方法，研究：（1）TRAF6在神经病理性疼痛模型中在脊髓的表达时程、细胞定位；（2）胶质细胞中TRAF6的表达调控以及下游信号通路；（3）TRAF6及其信号通路在神经病理性疼痛中的作用。本研究不但能进一步阐明胶质细胞调节慢性疼痛的胞内信号通路，也为研发以TRAF6为靶点的镇痛药物提供思路。

神经损伤诱导的神经病理性疼痛是临床上的难题。以往研究表明中枢神经系统中的胶质细胞在神经病理性疼痛的产生和维持中发挥重要作用。胶质细胞释放炎症因子，如TNF-a和IL-1b等参与神经炎症反应和慢性疼痛。TRAF6是TNF超家族和IL-1超家族信号转导的重要因子。本课题中我们研究了在脊神经结扎诱导的神经病理性疼痛模型中TRAF6在脊髓的表达分布和参与疼痛调节的机制。我们的结果显示，SNL诱导TRAF6在脊髓的表达持续上调，而且TRAF6主要表达在星形胶质细胞。在培养的星形胶质细胞，TNF-a和IL-1b诱导TRAF6表达上调，并诱导TRAF6依赖性的CCL2上调。TRAF6 siRNA抑制TNF-a和IL-1b诱导的JNK激活；JNK抑制剂降低TNF-a和IL-1b诱导的CCL2上调。在整体动物，鞘内注射TRAF6 siRNA抑制鞘内注射TNF-a和IL-1b诱导的机械痛敏。在SNL模型，抑制TRAF6的功能缓解了神经病理性疼痛。这部分结果表明，SNL诱导TNF-a和IL-1b表达增加，激活TRAF6，后者磷酸化JNK，并诱导CCL2表达增加，从而促进神经病理性疼痛。接下来我们研究了microRNA-146a对TRAF6的表达调控。我们发现在培养的星形胶质细胞，TNF-a、IL-1b和磷酸脂多糖（LPS）快速增加TRAF6的表达并缓慢增加miR-146a的表达。而且，miR-146a能阻断LPS诱导的TRAF6的增加、JNK激活以及CCL2的表达。LPS增加AP-1在miR-146a和ccl2启动子区的结合。TRAF6siRNA和JNK抑制剂降低LPS诱导的miR-146a的增加。在整体动物，鞘内注射TNF-a和LPS增加miR-146a的表达。鞘内注射miR-146a缓解TNF-a和LPS诱导的机械痛敏。在SNL诱导的神经病理性疼痛模型，SNL后脊髓中miR-146a表达上调；鞘内注射miR-146a缓解SNL诱导的神经病理性疼痛。这部分内容表明，一方面，miR-146a能通过抑制TRAF6/JNK/CCL2抑制神经病理性疼痛；另一方面，TRAF6/JNK通路可诱导miR-146a表达升高，内源性对抗炎症反应。我们的研究揭示了miR-146a/TRAF6/JNK/CCL2 这一重要的胞内信号通路在神经病理性疼痛中的作用，提示靶向该通路可能缓解神经病理性疼痛。