大黄鱼FoxP3基因的分子特征及功能研究

调节性T细胞是一类可调节其他免疫细胞的增殖、分化与功能，维持机体免疫平衡状态的T淋巴细胞。在人及小鼠中，转录因子FoxP3在调节性T细胞的发育、分化及免疫调节功能的发挥中起重要作用，可作为调节性T细胞的分子标记。FoxP3的功能与其转录调控作用密切相关。目前鱼类的调节性T细胞尚未被分离鉴定，Foxp3仅在斑马鱼中有基因序列报道。本项目拟在获得大黄鱼FoxP3基因的基础上，开展其分子特征及功能研究，明确FoxP3的组织分布与细胞内定位，分析免疫刺激后FoxP3在主要免疫器官中的表达调控模式，查明FoxP3对大黄鱼IL-2基因启动子的转录阻遏/激活作用，研究FoxP3基因沉默或体内过表达情况下对NF-κB激活及NF-κB所调控的细胞因子IL-4、IL-10 表达水平的影响，阐明鱼类Foxp3的转录调控作用，为将FoxP3作为分子标记应用于分离、鉴定鱼类调节性T细胞并研究其生物学功能奠定基础。

转录因子Foxp3在调节性T细胞的发育、分化及免疫调节功能发挥中起重要作用，其功能与其转录调控作用密切相关。本项目在前期获得大黄鱼FoxP3基因的基础上，明确了大黄鱼FoxP3（LycFoxP3）的分子特征，发现其在正常组织中呈组成型表达，亚细胞定位分析证实了其定位于细胞核；研究了免疫刺激后LycFoxP3的表达调控模式，发现在Poly I:C 或三联细菌疫苗刺激后LycFoxP3在大黄鱼脾脏和肾脏中的表达量均下降；细胞水平的功能分析显示LycFoxP3的过表达可显著下调大黄鱼白细胞介素-2（IL-2）基因启动子的活性，说明其可抑制IL-2基因的表达；活体RNAi试验显示LycFoxP3基因表达的沉默可显著上调IL-2、IL-17和IFN-的基因表达水平，说明LycFoxP3可能作为一个负调控转录因子发挥作用。这些研究结果对于深入了解鱼类FoxP3的功能具有重要意义。