从TLR4/NF-κB代谢通路探索清热化湿法治疗溃疡性结肠炎的作用机制

溃疡性结肠炎（UC）的发病率逐年上升，探讨UC 的发病机制，寻找安全有效的靶向药物日趋重要。临床研究表明大肠湿热证为UC的主要证型，清热化湿法治疗效果明显。清化肠饮为国家级名老中医杨春波经验方，其适应证为UC大肠湿热型，前期治疗总有效率为93.94%，但其作用机制不甚明确。最近研究发现，结肠上皮细胞TLR4／NF-κB信号转导通路的活化是UC发病过程的重要环节，而阻断其活化是UC药物治疗的一个新思路。本课题采用异种异体结肠粘膜组织致敏法建立UC大鼠模型，再加以结肠上皮细胞Caco-2 为研究平台，运用基因克隆、细胞转染、RT-PCR、Western Blot 等方法系统地探讨清热化湿法对UC结肠上皮细胞TLR4/ NF-κB通路的影响，以阐明其治疗UC的分子机制和作用靶点，为临床应用以及大肠湿热证UC大鼠模型的建立提供实验理论依据。

溃疡性结肠炎（UC）的发病率逐年上升，探讨UC 的发病机制，寻找安全有效的靶向药物日趋重要。临床研究表明大肠湿热证为UC的主要证型，清热化湿法治疗效果明显。清化肠饮为国家级名老中医杨春波经验方，其适应证为UC大肠湿热型，前期治疗总有效率为93.94%，但其作用机制不甚明确。最近研究发现，结肠上皮细胞TLR4／NF-κB信号转导通路的活化是UC发病过程的重要环节，而阻断其活化是UC药物治疗的一个新思路。本课题采用异种异体结肠粘膜组织致敏法建立UC大鼠模型，再加以结肠上皮细胞Caco-2 为研究平台，运用Western Blot 方法系统地探讨清热化湿法对UC结肠上皮细胞TLR4/ NF-κB通路的影响，以阐明其治疗UC的分子机制和作用靶点，为临床应用以及大肠湿热证UC大鼠模型的建立提供实验理论依据。研究结果表明：（1）成功采用免疫复合法、DSS诱导法分别建立了UC动物模型，并通过UC动物模型观察到清化肠饮可以显著降低UC动物模型的DAI评分，改善结肠组织黏膜病变程度，说明清化肠饮治疗UC是有效的。（2）清化肠饮可以明显降低促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8、SAA的表达，升高抗炎因子IL-10的表达，从而调节炎性细胞因子的平衡，控制炎症反应。（3）清化肠饮可以显著抑制TLR4和MyD88的表达，以及IB的磷酸化和阻止NF-B的核易位，表明清化肠饮能够多环节抑制TLR4/NF-B信号通路的激活,可能是清化肠饮治疗UC的机制之一。（4）在Caco-2细胞中，清化肠饮可以通过抑制JAK-STAT信号通路和增加SOCS3的表达来阻止LPS诱导的炎症反应，说明调节IL-6 / STAT3/ SOCS3信号通路可能是清化肠饮发挥其抗炎作用的机制之一。