异体骨髓间充质干细胞用于类风湿关节炎治疗及免疫机制研究

类风湿关节炎（RA）是一种多种炎性细胞和细胞因子参与，最终导致关节软骨破坏的自身免疫疾病。有效抑制这些炎性细胞的活化、炎性细胞因子的分泌，修复受损的关节软骨，一直是RA治疗的研究热点。骨髓间充质干细胞（BMSCs）的免疫抑制作用及向多种组织分化的特性，为解决这一问题带来希望。本项目组初步研究发现异体BMSCs及其分化的软骨细胞在体外能显著抑制RA患者II型胶原（CII）特异性T细胞的活化及部分炎性细胞因子的分泌，提示异体BMSCs治疗RA的可能性。以此为基础，本课题旨在：1. 研究异体BMSCs及其分化的软骨细胞对RA患者CII特异性T细胞、B细胞、单核细胞的免疫抑制作用及机制；2.研究异体BMSCs移植对RA动物模型（CIA）的影响；3.采用荷RA组织的联合免疫缺陷小鼠（SCID-HuRAg）模型，研究RA患者滑膜对BMSCs分化的软骨组织的作用；为采用BMSCs治疗RA提供依据。

类风湿关节炎（RA）是一种由多种炎性细胞和细胞因子参与，最终导致关节软骨破坏的自身免疫疾病。有效抑制这些炎性细胞的活化、炎性细胞因子的分泌是RA治疗的研究热点。骨髓间充质干细胞（BMSCs）为解决这一问题带来希望。本实验通过体内、外实验（1）成功建立了体外分离、鉴定骨髓间充质干细胞（BMSCs）的实验体系；（2）成功建立BMSCs在体外诱导其向软骨细胞分化的方法；（3）成功建立CII诱导的DBA1小鼠模型，C57BL/6小鼠模型，以及SCID-HuRAg模型；并在此基础上发现：（1）BMSCs及其诱导分化的软骨细胞在体外可抑制RA患者T细胞的增殖、活化、分泌炎性细胞因子（IL-17A、IFN-γ和TNF-α）以及趋化能力；可提高抗炎细胞因子的表达（IL-4 和IL-10）；并可抑制Th17、Th1亚群的表达，上调Th2亚群的表达，对Treg亚群并无明显影响；TGF-β1在介导抑制T细胞的作用中发挥重要的作用；（2）BMSCs及其诱导分化的软骨细胞体外可抑制RA患者B细胞的增殖，BAFF-R的表达，抗CII抗体以及免疫球蛋白（IgG，IgM和IgA）的产生；显著抑制幼稚型CD27-IgG+B细胞比例的降低和记忆型CD27+IgG+B细胞比例的升高，但对于CD27+IgD- B细胞无显著抑制作用；抑制B细胞的的趋化能力；TGF-β1在介导抑制B细胞的作用中也发挥重要的作用。（3）BMSCs体外可抑制RA患者单核细胞表达CD80和CD86，抑制其分泌细胞因子（TNF-α）和趋化能力。（4）通过初次免疫后第14d、22d尾静脉注射，异体BMSCs可显著抑制CIA小鼠模型的发病率、关节炎指数以及血清中CII抗体，以及TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-8、MMP-3等细胞因子的产生，并可上调调节性B细胞（B10细胞亚群）、Treg的表达，抑制Th1细胞亚群、T17细胞亚群的升高。（5）但是，通过SCID-HuRAg模型发现，BMSCs诱导的软骨细胞并不能够抑制RA来源的滑膜细胞对其的侵袭破坏。上述结果提示：（1）静脉注射异体BMSCs可能是RA一种潜在的治疗方法，但治疗时机的选择至关重要。（2） RA患者关节炎症控制不佳时，移植BMSCs诱导的软骨细胞修复RA受损的关节软骨，可能会再次受到破坏。