胞质脂肪颗粒影响猪卵母细胞冷冻耐受性的关联机制

脂肪颗粒(Lipid Droplets)是卵母细胞重要的细胞内容物，猪卵母细胞中高含量的脂肪颗粒导致细胞对低温十分敏感,造成冷冻保存效率很低,脂肪颗粒的冷冻损伤也是造成冷冻卵母细胞发育能力显著下降的重要原因之一，目前国内外对此问题还缺乏深入研究。本研究采用电子投射显微镜、免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜等手段，分析猪卵母细胞冷冻前后胞质脂肪颗粒及表面功能蛋白Perilipin、CIDE在空间分布方面的变化;采用Real Time-qPCR技术、TUNEL检测技术，检测冷冻前后卵母细胞中Perilipin及CIDE表达量的差异及其对细胞凋亡的影响;采用孤雌激活的方法检测卵母细胞发育潜力,并结合前述方法分析Perilipin及CIDE在调节猪卵母细胞脂肪颗粒代谢中的作用。本研究对于阐明胞质脂肪颗粒与猪卵母细胞冷冻耐受性的关联机制、进一步提高卵母细胞冷冻效率有着重要作用和意义。

根据任务书要求：项目进行了采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜、Qrt-PCR和western blotting等手段，分析猪卵母细胞体外成熟过程中胞质脂肪颗粒及表面功能蛋白Perilipin 在空间分布及蛋白表达的变化等研究。研究发现Perilipin 1 在卵母细胞中不表达,Perilipin2是猪卵母细胞中的脂肪颗粒结合蛋白，Perilipin 2 和脂肪颗粒在GV期和MII期卵母细胞中呈现典型的共分布， Perilipin 2 在GV期卵母细胞中的表达水平显著高于MII期。此外，研究表明：t10c12 CLA通过调节MAPK活性及COX-2表达量促进猪卵母细胞核成熟，通过提高卵母细胞内MAPK活性及氧化还原能力促进猪卵母细胞的胞质成熟。经添加t10c12 CLA成熟培养的卵母细胞，在冷冻保存过程中，胞内线粒体极性升高，维持线粒体的正确分布，并可保护脂肪颗粒经历低温打击后形态的完整性，进而提高冷冻解冻后卵母细胞的发育潜力。截至目前，项目共培养博士研究生2人，硕士研究生1人，已发表论文4篇，其中SCI论文2篇，国内外会议论文2篇。