MiR-138靶向VIM调节胰腺癌细胞的侵袭转移

胰腺癌的侵袭转移机制是研究的重点和热点.既往的研究表明：波形蛋白（VIM）在胰腺癌细胞中的再表达及其表达的调控在胰腺癌的侵袭转移过程中发挥重要作用。我们的前期研究发现：SSTR2或RNAi下调VIM的表达抑制胰腺癌细胞的侵袭转移；但其转录后调控研究甚少。我们利用生物信息学软件预测出miR-138和VIM存在理论上的调控关系；为此，我们进行了预实验发现miR-138在高侵袭转移胰腺癌细胞株 (高表达VIM)低表达，而在低侵袭转移细胞株(不表达或低表达VIM)高表达；因此，我们提出miR-138通过靶向调控VIM表达参与胰腺癌的侵袭转移这一假说。本项目将以胰腺癌组织和不同转移潜能胰腺癌细胞株为研究对象，采用定点突变、miRNA活性报告系统及荧光差异蛋白质组学等生物学技术结合荧光活体成像技术，确立miR-138与VIM的调控关系，最终明确miR-138通过调控VIM的表达参与胰腺癌的侵袭转移。

研究背景：肿瘤的发生、发展和 miRNA 的表达失调密切相关。我们采用miRNAs芯片检测发现miR-138-5p在3对胰腺癌组织中较癌旁胰腺组织低表达。研究内容：1. 采用qRT-PCR检测miRNA-138-5p在14对配对的胰腺癌和癌旁胰腺组织中的差异表达，并进行临床病理分析；检测其在8株人胰腺癌细胞、HPDE及原代人正常胰腺上皮细胞中的表达。2.采用CCK-8/EdU检测miR-138-5p对胰腺癌细胞增殖活性、增殖能力的影响；平板克隆形成实验、流式细胞术、裸鼠体内实验检测其对胰腺癌细胞克隆形成、细胞周期、裸鼠皮下成瘤的影响。3. 采用Transwell小室侵袭细胞划痕实验、裸鼠胰腺癌肝转移模型检测 miR-138-5p对胰腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响；CCK-8检测其对胰腺癌细胞化疗耐药的影响。4.采用双荧光报告素酶实验验证miR-138-5p靶向调控FOXC1、VIM的3’UTR；在Capan-2及PANC-1 细胞中，qRT-PCR 和 Western blot检测miR-138-5p调控FOXC1、VIM基因mRNA和蛋白的表达；采用siRNA分别下调FOXC1、VIM的表达，检测其对胰腺癌细胞增殖、侵袭、转移的影响；检测miR-138-5p对细胞周期蛋白CyclinD1、VIM、E-cadherin表达的影响。研究结果：1.miR-138-5p 在胰腺癌细胞、组织中低表达，与胰腺癌的病理分化和远处转移相关。2.细胞学及动物实验证实，miR-138-5p能显著抑制胰腺癌细胞增殖、皮下成瘤及侵袭转移能力，增加了胰腺癌细胞对5-FU的化疗敏感性。3.双荧光素酶报告基因实验证实了miR-138-5p与FOXC1及VIM 3’UTR之间存在直接靶向关系，qRT-PCR和Western blot 方法证实miR-138-5p对胰腺癌细胞内源性FOXC1及VIM表达调控。4. miR-138-5p靶向调控FOXC1表达，下调CNND1表达，阻滞细胞周期于G0/G1期。5.miR-138-5p靶向调控VIM表达抑制人胰腺癌细胞侵袭转移。研究意义：1.证实了miR-138-5p在胰腺癌中低表达与胰腺癌细胞的增殖、侵袭转移密切相关；2.阐明了miR-138-5p抑制人胰腺癌细胞增殖、侵袭、转移的的分子机制之一是分别靶向调控FOXC和VIM的表达。