云南蚕区BmNPV流行株系鉴定及交互保护

According to the survey of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV)，BmNPV is popular in Yunnan sericutural area and seriously ham for sericulture. The diversity of organisms and geography in Yunnan sericutural area indicate that there will be abundant in strains. And this was proved by the toxicity test from the eight areas of the Yunnan province and the preliminary strain identification. This study will molecular identification to the popular strains in Yunnan sericutural area and confirm the popular strains as well as distribution, the toxicity of the different strains also will be test. The silkworm cells will be applied to test the cross-protection between the popular strain and attenuated strains for knowing the degree. Besides, to study the molecular mechanism of cross-protection, the expression of the inactivated protein (such as red fluorescent protein, serine protease) that in the progress of cross-protection will be tested. Results of this study will provide the strains for anti-BmNPV evaluation and supplement for effective controlling the popular BmNPV stains by attenuated strains of cross-protection.

云南蚕区BmNPV危害调查表明，BmNPV在云南蚕区普遍发生，危害严重。云南蚕区生物和地理生态的多样性预示云南蚕区BmNPV存在丰富的株系，这一设想已由测定云南蚕区8个地方BmNPV对家蚕的致病力存在显著差异和初步的株系鉴定结果得以证明。本研究拟对云南蚕区BmNPV流行株系进行分子鉴定，明确云南蚕区主要BmNPV流行株系及分布；测定各株系对家蚕的致病力，用家蚕细胞系和蚕个体测定1-2种弱毒株对流行株的交互保护作用，明确弱毒株对流行株的交互保护程度；测定发生交互保护作用的细胞系和蚕体内病毒失活相关蛋白（红色荧光蛋白、丝氨酸蛋白酶）表达情况，研究交互保护作用分子机制。为云南蚕区家蚕抗BmNPV品种评价提供测试株系，同时为利用弱毒株交互保护作用有效防控云南蚕区主要BmNPV流行株危害提供依据。

由BmNPV感染引起的家蚕核型多角体病毒病是云南甚至世界蚕区家蚕的最主要病害。地理气候多样性预示云南蚕区BmNPV存在丰富的株系。本项目在云南蚕区不同生态区域内采集BmNPV样本243份，克隆以乡镇为单位的85株BmNPV bro-d基因，构建系统发生树，进行云南蚕区BmNPV流行株系鉴定，揭示了云南蚕区BmNPV的主要流行株系及分布；测定比较19个有代表性的云南蚕区BmNPV株系在蚕体和细胞上的致病力，测定了5种人工弱毒处理株对流行株的交互保护作用，采用荧光定量PCR技术检测发生交互保护作用蚕体中家蚕酯酶、丝氨酸蛋白酶基因表达和流行株增殖情况，探讨了交互保护作用的部分机制，主要获得以下结果：.1. 云南蚕区BmNPV流行株系主要为三个类群，其中clade I 35株，地理分布相对集中，主要分布于云南昆明市、曲靖市、普洱市、保山市、大理州、楚雄州、红河州与迪庆州。clade II 33株，主要分布于普洱市、楚雄州和曲靖市。clade III 17株，在昆明、普洱、昭通、红河州、大理、楚雄、迪庆州、保山地区呈不规侧分布..2. 不同BmNPV株系对家蚕的致病力差异较大，12株致病力较强，7株致病力较弱。 最高死亡率达98.15%，而最低死亡率只有53.70%。不同BmNPV株系对细胞毒力也显示较大差异。6株病毒粒子的滴度较高，2株病毒滴度处于中等, 3株病毒滴度较低, 最低的病毒粒子的滴度只有100TCID50。.3. 5种人工弱毒株中除高压灭菌处理株对流行株无交互作用外，其余4种均显示一定交互作用，基因敲除弱毒株对流行株的交互保护作用最强。发生交互保护作用蚕体内家蚕酯酶、丝氨酸蛋白酶基因表达显著上调，同时BmNPV流行株增殖低于对照组。由此推导交互保护作用的部分机制是弱毒株感染启动了蚕体的抗性通路，使相关抗性基因表达，对随后接种的流行株的感染和复制起到了抑制作用，从而表现出交互保护作用。本研究鉴定出的流行株为云南蚕区抗BmNPV家蚕品种评价和育种提供测试株系，其它研究成果为利用弱毒株交互保护作用有效防控主要BmNPV流行株危害提供依据。