补肾益气通络化浊法经PKC通路治疗糖尿病肾病的作用及机制研究

Diabetic nephropathy (DN) is the first cause of end-stage renal disease. The study found,connexin 43 (Cx43) expression in renal cells, and plays an important role in the pathogenesis and development of DN, high glucose phosphorylated highly Cx43 leading to its down regulation by protein kinase C (PKC) ，and then Cause renal mesangial cell hypertrophy, glomerular hyperfiltration in DN.In the experimentally we observed in Tangshenkang could markedly up-regulate the mRNA and protein expression of DN Cx43 in kidney of rats. We put forward the Hypothesis that "Tangshenkang prevent and treatment diabetic nephropathy through regulating the PKC pathway and up-regulation of Cx43. Our group will take Cx43 and PKC passway as a target to research that tangshenkang how to regulate PKC passway，ploing the cell model of SV40 MES 13 mesangial cells、CD57BL/6 renal tubular epitClarify the mechanismshelial cell and the animal models of db/db mouse,what had recognized by the world，from the whole - cell - molecular level,And then clarify the mechanismsem that tangshenkang raise Cx43,Reveal the new target for the method of Kidney tonifying，Qi Supplementing，Collateral Dredging，Turbidity Dissolving treamenting DNProvide new ideas for Chinese medicine treatment of DN.

糖尿病肾病（DN）是终末期肾病首位病因。研究发现，细胞间隙连接蛋白43（Cx43）在肾脏多种细胞表达，且在DN发病与进展中起重要作用，高糖通过蛋白激酶C（PKC）高度磷酸化Cx43导致其下调，引起肾脏系膜细胞肥大、肾小球高灌注发生DN。课题组前期研究发现，具有补肾益气通络化浊作用的中药复方糖肾康能改善DN大鼠肾脏高滤过、细胞外基质积聚、细胞肥大等病理变化，且发现糖肾康可明显上调DN大鼠肾脏Cx43表达。据此提出"糖肾康可能通过PKC通路调控Cx43防治DN"假说。课题以Cx43为切入点，以PKC信号途径为主线，采用国际公认的SV40 MES 13肾小球系膜细胞模型、CD57BL/6肾小管上皮细胞模型及db/db小鼠动物模型，从一个新的视角，在整体-细胞-分子不同层次上，研究糖肾康对DN作用及可能的分子调控机制，以期为DN的中药治疗提供理论和实验依据。

糖尿病肾病（DN）是终末期肾病首位病因，给家庭和社会带来了巨大的经济负担。DN早期病理表现高滤过、细胞外基质积聚、细胞肥大。研究发现，细胞间隙链接蛋白43（CX43）在肾脏多种细胞表达，且在DN发生与进展中起重要作用，高糖通过蛋白激酶C（PKC）高度磷酸化Cx43导致其下调，引起以上病理变化而发生DN。课题组前期研究发现，具有补肾益气通络化浊作用的中药复方糖肾康（TSK）能够改善DN大鼠肾脏早期病理变化，上调DN大鼠肾脏Cx43表达。本项目，课题组进一步开展以下研究：（1）体外研究：采用糖肾康含药血清干预高糖诱导SV40MES13肾小球系膜细胞（GMCs）、CD57BL/6肾小管上皮细胞；（2）体内研究：使用糖肾康灌胃干预db/db糖尿病肾病小鼠模型。结果如下：（1）体外研究：①TSK含药血清中、高剂量组吸光度值在24h、48h、72h和96h各时间段均明显下降，72h开始TSK含药血清高剂量组优于阳性对照组。②治疗到72h时，G0/G1期细胞百分比升高，S期百分比降低，细胞增殖指数明显降低， TSK含药血清高剂量组优于阳性对照组。③阳性对照组，TSK含药血清中、高组均能改善肾小球系膜细胞的细胞间隙连接通讯功能（GJIC），TSK含药血清高剂量组最优。④阳性对照组，TSK含药血清中、高剂量组均能降低DAG、IP3、PKC的mＲNA，升高CX43mＲNA，TSK含药血清高剂量组更优。（2）体内研究：治疗后与对照组比较①TSK中、高剂量组小鼠体重明显降低；②在第8周，TSK各剂量组小鼠的随机血糖均明显降低，TSK高剂量组降糖效果持续；③TSK中、高剂量组TG，TC，LDL-C，Cys-C均明显下降，CCr，HDL-C上升；④TSK各剂量组ECM(FN，LN，ColⅢ和ColⅣ)，α-SMA，TGF-β和CD8+显著降低，且呈剂量依赖性。结论及意义：TSK能够降低DN小鼠体重，改善糖脂代谢及肾功能，降低肾脏组织ECM沉积，抑制GMCs增生，调节细胞周期，促进增殖细胞凋亡，从而减缓糖尿病肾病进程。其可能机制是TSK阻断了肾脏组织DAG/PKC信号通路，增加了Cx43表达，改善了GJIC。本研究为补肾益气通络化浊法治疗DN提供了理论依据，为中药复方TSK的新药开发奠定了基础。