过继特异性同种CTL清除巨细胞病毒感染

慢性病毒感染直接危害着人类的健康，已成为危害公共卫生的一大难题。在慢性病毒感染过程中，机体CD8+ T细胞对慢性感染病毒表现为不应答或弱应答。以诱导或激活患者自身病毒特异性细胞毒性T细胞（CTL）为目的的免疫治疗方案并不能有效的清除慢性感染病毒。研究提示同种反应性T细胞也具有pMHC特异性，同种反应性T细胞库中存在针对病毒表位的特异性T细胞，为打破长期病毒感染引起的耐受提供了新的途径。本项目拟建立鼠巨细胞病毒（MCMV）慢性感染模型，通过pMHC二聚体技术构建人工抗原提呈细胞（APC），在体外制备针对病毒优势表位的特异性同种CTL，过继慢性感染小鼠，探讨病毒特异性同种CTL清除宿主体内慢性感染病毒的作用。

慢性病毒感染直接危害着人类的健康，已成为危害公共卫生的一大难题。由于病毒感染引起的自身耐受，通过传统的激活患者自身的T细胞的的治疗思路并不能产生有效的清除病毒作用。本项目改变传统病毒免疫治疗的思路，拟体外诱导并大量扩增出病毒抗原特异性的同种CTL进行过继免疫治疗，清除病毒感染。探讨病毒特异性同种CTL对慢性病毒感染的清除作用。为此成功构建H-2Kb/IgG2aFc/β2m二聚体昆虫表达质粒，转染到昆虫细胞Sf9中，并大量饲养该细胞，收获上清，得到该蛋白，加载到MCMV优势表位肽上，MCMV肽-巨噬细胞体内外联合培养诱导Balb/c小鼠自身淋巴细胞产生单一pMHC特异性的同种CTL。体内外联合刺激所产生的CTL具有单一pMHC特异性，并对特定靶细胞（MCMV肽/dimer -RMA/S）有特异性的杀伤作用，而对含有其它无关表位的靶细胞（OVA-RMA/S，RMA/S和SP2/0）无杀伤效应。将C57BL/6(H-2Kb) 巨细胞病毒（MCMV）的慢性感染小鼠作为受者，用获得的pMHC特异性CTL通过尾静脉过继；对照组用H-2Kd小鼠的脾细胞进行过继，过继细胞量为1×107个。结果显示特异性刺激（MCMV/dimer-Mφ）诱生的同种CTL细胞过继受者感染MCMV的C57BL/6小鼠后，其肾脏内均未出现明显的淋巴细胞浸润。提示单一pMHC特异性CTL能够在体外定向杀伤特定性状的靶细胞，而体内杀伤特异性的靶细胞作用不是很显著。