La蛋白在铁诱导丙肝病毒蛋白翻译中的作用及机制研究

Hepatitis C is a severe global health problem. People can not realize it because it's symptom is not apparent. La protein plays an imporant role in regulating HCV RNA tanslation. More importantly, iron overload, a common finding among HCV patients, have poor response to treatment with IFN-α, but the mechanism is poorly understood. This study wants to explore: 1. construction of plasmid consist of the HCV IRES; 2. effects of iron on HCV viral translation and ROS activity; 3. effects of iron on the expression and translocation of La protein; 4. effects of iron overload on IFN-induced HCV viral translation; 5. effects of ROS or La inhibition on IFN-induced HCV viral translation under iron overload. This study shall assist our understanding of the mechanism of hepatic iron overload for better design of the preventive and therapeutic strategy for HCV infected patients.

丙型肝炎是一个严重的全球性健康问题，在我国丙肝尚未为公众广泛认知，初始症状不明显，往往被患者忽略，易发展成为肝硬化和肝癌。La蛋白对HCV病毒蛋白翻译起重要调控作用。临床上丙型肝炎患者大多存在肝脏组织铁负荷过重的现象，并且对干扰素抗病毒治疗应答率会显著降低，但其确切的机制尚不清楚。本课题拟在细胞实验的基础上，应用细胞生物学、免疫细胞化学和分子生物学等方法研究：1、构建HCV IRES 表达载体；2、铁对HCV病毒蛋白翻译起始及ROS活性的影响；3、铁对La蛋白表达/移位的影响；4、高铁对IFN抑制HCV病毒蛋白翻译的影响；5、抑制ROS和干扰La对高铁状态下IFN抑制细胞内HCV蛋白翻译影响。本课题将深入认识铁与HCV病毒翻译的关系，在细胞和分子水平上进一步阐明铁参与IFN抑制HCV病毒蛋白翻译的分子机制，为丙型肝炎的预防、治疗及药物的开发提供理论依据。

丙型肝炎是一个严重的全球性健康问题，在我国丙肝尚未为公众广泛认知，初始症状不明显，往往被患者忽略，易发展成为肝硬化和肝癌。La蛋白可能对HCV病毒蛋白翻译起着一定的调节作用。临床上丙型肝炎患者大多存在肝脏组织铁负荷过重的现象，并且对干扰素抗病毒治疗应答率会显著降低，但其确切的机制尚不清楚。本课题在细胞实验的基础上，我们进行了4个方面的研究工作：1、成功构建了HCV IRES 表达载体。2、开展了铁对HCV病毒蛋白翻译起始及ROS活性影响的研究。结果显示，细胞内铁水平与HCV IRES依赖的病毒蛋白翻译以及胞内ROS活性呈正向变化。3、开展了铁对HCV病毒蛋白翻译起始因子影响的研究。结果显示，铁可以增加Huh-7细胞内的La、eIF3A mRNA和蛋白的表达，而加入铁鳌合剂去铁胺则可以特异性地降低La、eIF3A mRNA和蛋白的表达。4、开展了高铁诱导HCV病毒蛋白翻译可能机制的研究。结果显示，过氧化物酶抑制剂DPI可以显著抑制铁诱导的ROS活性水平。在高铁诱导下La蛋白可以从胞浆移位到胞核内，而DPI可以抑制La蛋白的胞核移位。铁还可以显著增加Nrf2蛋白的表达，而加入DPI可以显著抑制铁诱导的Nrf2蛋白的表达增加。总之，研究结果提示HCV可能借助细胞内铁调控机制增加了病毒蛋白的翻译，其中铁诱导的La蛋白表达变化可能在其中起着重要的调节作用。