晶状体上皮细胞增殖周期中磷酸化蛋白质的时空表达差异

后发性白内障(PCO)是残留的晶状体上皮细胞（LEC）增殖引起的，而蛋白质的磷酸化调控是细胞增殖周期中最普遍、最重要的形式。本项目应用流式细胞仪的细胞分选功能, 结合免疫沉淀、双相电泳(2D)、质谱等蛋白质组技术和RNA干扰技术，将体外培养的LEC按细胞周期进行分选；提取不同期相的LEC蛋白质用泛抗磷酸化抗体进行免疫共沉淀，富集磷酸化蛋白质并进行双相电泳分离，比较LEC增殖周期中磷酸化蛋白质的时空表达差异；结合质谱技术和生物信息学资源对表达差异的磷酸化蛋白肽质量指纹图谱及磷酸化位点进行鉴定，以期发现不同期相"关键"磷酸化蛋白质和新蛋白；对已知蛋白用抗体芯片或免疫印迹技术验证；对未知蛋白设计特异性siRNA封闭其基因表达，并观察对LEC周期及增殖的影响，为后发性白内障的防治研究及新药开发提供新的思路和理论依据。