miR-21通过Ras-MAPKs信号通路介导负调控Net基因表达在胰腺导管腺癌发生中的作用机制研究

Transcription regulation plays a pivotal role in tumorigenesis. Previous studies showed that ternary complex factor Net suppressed the transcriptional activation of c-fos/AP-1, and then can suppress proliferation and growth of pancreatic carcinoma cell, but the upstream regulatory mechanism is not clear. Studies showed that the expression and suppressor function of Net gene is regulated by Ras-MAPKs signaling phosphorylation. The recent studies of the project group showed that miR-21 can activate the phosphorylation activity of Ras-MAPKs signaling in pancreatic cancer cell lines; qRT-PCR quantitative analysis showed the expression of Net is conversely correlated with that of miR-21 in the same pancreatic carcinoma tissues or cell lines. Therefore, we hypothesis that there may exist a regulatory pathway which miR-21 regulates Net expression mediated by Ras-MAPKs signal pathway in pancreatic cancer. Hence, the project is about to validate the molecular mechanisms of miR-21 negatively regulating Net through Ras-MAPKs signaling by gene knockout and transfection method in vivo and in vitro. This might provide new therapeutic strategies for molecular targeted intervention of pancreatic carcinoma with miR-21 and/or Net as target point in the future.

转录调控在肿瘤形成和演变过程中发挥着“枢纽”样作用，项目组前期实验发现Net基因能够抑制c-fos/AP-1的转录活性，进而抑制胰腺癌细胞的增殖和生长，但其上游调控机制尚不清楚。研究表明，Net基因表达及其抑癌功能的发挥受Ras-MAPKs信号磷酸化调节，而项目组近期研究发现miR-21能够激活胰腺癌细胞中Ras-MAPKs信号的磷酸化活性；qRT-PCR定量分析显示在同一胰腺癌组织或细胞中Net基因与miR-21表达呈反相关关系。由此推测，胰腺癌中可能存在着一条Ras-MAPKs信号介导miR-21负调控Net基因表达的调控途径。本课题将分别以miR-21和Net为调控靶点，通过基因敲除、基因转染等方法正负调控，在体内外验证miR-21通过Ras-MAPKs信号介导负调控Net基因表达在胰腺癌发生中的分子作用机制，这将为后续以miR-21和/或Net为靶点进行分子靶向干预提供新的治疗策略

胰腺癌是严重危害人类健康的常见消化道恶性肿瘤，也是预后最差的恶性肿瘤之一由于缺乏早期发现的有效方法，大多数胰腺癌患者处于疾病晚期，仅有20%的患者获得手术治疗机会，术后5年生存率不足20%。全世界每年有超过20万人死于胰腺癌。近年来其它类型的肿瘤死亡率有所下降，但胰腺癌的发生率及死亡率仍逐年上升，预计在2030年将成为癌症相关死亡的第二大常见原因。因此，研究胰腺癌发生发展的分子机制，进而寻找早期诊断及疗效和预后判断指标是胰腺癌研究中亟待解决的重大问题。在本研究中，我们检测了63例胰腺癌患者的组织微阵列以及6种胰腺癌细胞中miR-21的表达，发现miR-21的表达增高。我们进一步验证发现，EGF能促进miR-21的表达，miR-21通过抑制下游靶基因Spry2的表达，调控MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性，进而促进EGF所诱导的细胞增殖，促进细胞周期进程，抑制细胞凋亡。此外，我们检测了miR-21、Spry2在胰腺癌组织和相应癌旁正常组织中的差异表达，并分析二者的相关性以及与临床病理特征之间的关系。该研究深入探讨了EGF/miR-21/Spry轴在胰腺癌生长、增殖中的作用及其分子机制，不仅为揭示胰腺癌的发生发展机制提供新的理论依据，亦可为胰腺癌的诊断和预后判断提供新的分子标记物，具有非常重要的理论意义和潜在临床应用价值。