含汉坦病毒嵌合基因的复合型多表位新型重组腺病毒的免疫学特性研究

肾综合征出血热是由汉坦病毒引起的一种急性病毒性传染病，目前尚缺乏特异有效的防治方法。本项目拟在前期工作的基础上，以复制缺陷型腺病毒Adeno-XTM系统为基础，利用基因重组技术，将腺病毒转移载体的启动子替换为高效启动子CAG，以提高汉坦病毒融合基因M-S0.7的表达水平；在此基础上进一步构建加入S片段上针对人的CTL多个表位串联基因，以提高刺激细胞免疫应答的能力；此外联合应用抗原加工分子基因- - HSP70 的C末端，使其发挥免疫佐剂的功能。之后对这些重组腺病毒的免疫学特性进行系统比较研究，以期达到汉坦病毒不同结构蛋白在刺激机体免疫应答能力中的优势互补，特别是进一步提高刺激体液以及细胞免疫应答的能力。本研究将为HFRS基因工程疫苗的研究提供备选的重组腺病毒疫苗株，以及重要的理论和实践基础。

本项目按计划如期顺利完成。通过本项目课题组有如下发现：以改建的含CAG启动子的pShuttle转移载体为基础、添加CTL串联表位和（或）HSP70 C末端序列的策略，可有效提升含目的基因HTV M-S0.7的重组腺病毒诱导体液免疫应答及细胞免疫应答的能力。其中添加HSP70C的rAd-GnS0.7-CTLH及rAd-GcS0.7-CTLH免疫小鼠后诱导产生的中和抗体滴度、对靶细胞的CTL杀伤率及IFN-γ的分泌水平等均高于灭活疫苗对照组。以针对三个单独的CTL表位序列的15 aa肽段分别作为刺激物进行ELISOPT实验，结果显示NP48（aa331~345）和NP60（aa421~429）肽段的刺激效果更为突出，表明其包含的CTL表位在诱导机体细胞免疫应答中的作用更为突出。本项目中的重组腺病毒rAd-GnS0.7-CTLH及rAd-GcS0.7-CTLH可作为汉坦病毒基因工程疫苗研制的候选疫苗组份之一。