毛囊神经嵴干细胞源性运动神经元移植修复兔坐骨神经缺损的应用基础研究

周围神经损伤是临床常见伤。目前，周围神经损伤修复多采用干细胞、施万细胞、自体神经移植等手段，由于没能很好地解决神经生长速度慢和效用器、感受器变性快的矛盾，未取得理想的修复效果，尤其是长距离周围神经缺损的修复，为此，我们实验室提出了"桥接神经元修复周围神经损伤"的设想。毛囊神经嵴干细胞（hfNCSC）可来源自体、取材方便，可诱导分化为神经元细胞。本课题拟在前期工作基础上，通过诱导hfNCSC为运动神经元细胞，探讨其生物学特性及功能，并移植修复兔坐骨神经缺损，研究hfNCSC 源性的运动神经元在坐骨神经中的演变规律、及与靶肌肉和新生神经纤维的联系，观测受损坐骨神经功能恢复情况，旨在为临床周围神经损伤探讨一个新的方法。

针对长距离周围神经缺损修复效果欠佳的现状，本课题采用毛囊神经嵴干细胞（hair follicle neural crest stem cells, hfNCSCs）源性运动神经元移植，以桥接神经元的办法修复大鼠坐骨神经缺损，并对修复效果进行评估，证实了桥接神经元的办法修复坐骨神经缺损的可行性，并证明了腓肠肌失神经支配的效果得到缓解。具体如下：首先分离培养大鼠触须垫中hfNCSCs ，并分别将其向运动神经元和施万细胞进行诱导分化，检测了hfNCSCs源性的运动神经元和施万细胞的生物学特性，证明了hfNCSCs源性的运动神经元具备经典运动神经元的特性。应用化学方法对犬坐骨神经脱细胞，成功制备了脱细胞神经支架。以hfNCSCs源性运动神经元和施万细胞、犬脱细胞神经支架构建组织工程神经移植体，分别进行体外培养和体内移植，经相关检测证实体外培养的组织工程神经移植体具备神经电生理特性，其中的hfNCSCs源性运动神经元和施万细胞存活、增殖良好并分别保持了运动神经元和施万细胞的生物学特性。移植到大鼠坐骨神经缺损处的组织工程神经移植体，其中的hfNCSCSs源性运动神经元可长期保持运动神经元的生物学特性; hfNCSCs源性运动神经元移植后，检测到效应器较高的肌肉湿重维持率和其中神经肌肉接头的形成，效应器失神经支配的效果得到缓解。