抗体修饰的miR-21脂质体靶向急性缺血心肌的研究

Acute ischemic heart disease (AIHD) endanger people 's lives and health is one of the major diseases , myocardial topical studies confirmed miR-21 with acute myocardial infarction have a therapeutic effect . But miR-21 in cardiac and skeletal muscle are expressed in skeletal muscle may occur if the side effects of systemic administration problem . In ischemic myocardium cardiac troponin T (cTnT) is based on highly specific expression , we propose anti- cTnT antibody-mediated targeted delivery system conceived the study . Preparation of the subject through a thin film evaporator containing a fluorescent labeled miR-21 PEG- liposomes , and then chemical coupling method monoclonal anti- cTnT PEG hydroxyl groups bonded to the liposome surface. In electron microscopy , laser particle size analysis of particle morphology, dispersion conditions ; determined in accordance with the principles of biomechanics antibody conjugated liposomes to target cells and the role of pro- strength , and to study its targeting factors ; then established coronary artery ligation animal models of ischemic arrhythmias , administered intravenously , targeting miR-21 was observed distribution of the fluorescent marker. In this study, the drug will be administered targeted nucleotide cTnT antibody -mediated cardiac studies provide scientific experimental data.

急性缺血性心脏病（AIHD）是危害人民生命健康的主要疾病之一,研究证实心肌局部给药miR-21对急性心肌梗死有治疗作用。但因miR-21在心肌和骨骼肌上都表达，若全身给药可能产生骨骼肌副作用的问题。以缺血心肌组织中心肌肌钙蛋白T（cTnT）特异性高表达为依据，我们提出抗cTnT抗体介导靶向给药系统研究的设想。本课题通过薄膜蒸发法制备载有荧光标记miR-21的PEG-脂质体，再以化学偶联法将抗cTnT单抗键合到脂质体表面的PEG羟基上。以电镜、激光粒度分析颗粒形态、分散性情况；根据生物力学原理测定抗体偶联脂质体对靶细胞亲和作用强弱，并研究其靶向性的影响因素；再以冠脉结扎法建立大鼠缺血性心律失常动物模型，以静脉方式给药，观察荧光标记的miR-21靶向性分布情况。本研究将为载药核苷酸cTnT抗体介导心肌靶向给药研究提供科学的实验数据。

急性缺血性心脏病（AIHD）是一种危害人类健康的严重疾病。研究已经证实，局部心肌给予miR-21对急性心肌梗塞具有治疗作用。然而，miR-21可以靶向肿瘤，免疫细胞以及心脏组织。当缺血发生时，心肌肌钙蛋白T（cTnT）高度表达，其可以用作配体，锚以其抗体修饰的脂质体。我们设计了一种新型脂质体，用抗cTnT抗体（cT-21-LIP）修饰，负载miR-21以改善急性心肌梗死期间的心脏功能。用原子力显微镜，电子显微镜和动态激光扫描仪观察脂质体的形态和分散性。活细胞工作站和流式细胞仪观察原代心肌细胞的体外摄取情况，并通过体内成像评价心肌靶向性的累积。尾静脉注射cT-LIP后，缺血区荧光示踪剂的积聚明显高于LIP。通过小动物超声系统评价cT-21-LIP对心脏功能如心电图和功能射血分数的影响。给药后与对照脂质体和游离的miR-21相比，cT-21-LIP在AMI后7天心脏射血分数恢复到75.41。实时定量PCR检测miR-21的表达水平，免疫组织化学方法检测热休克蛋白70（HSP 70）的表达。免疫组化显示心肌梗死后第3天和第4天cTnT高表达。给药后，miR-21表达显著上调，HSP-70蛋白表达也随之上调。细胞能量代谢的实验结果表明，cT-21-LIP以及21-LIP孵育降低了细胞有氧呼吸能力，无氧呼吸能力提高，这在心肌细胞缺氧时保护心肌细胞免受进一步损伤。总之，cT-21-LIP能够显著提高纳米囊泡对缺血心肌组织的靶向效率，并且递送的miR-21到AMI缺血心区，使心脏的射血分数恢复到正常值。所有数据证实，cT-21-LIP显着改善了其miR-21的治疗作用并且可以用作AIHD的新疗法。项目资助发表SCI论文1篇，待发表1篇。培养硕士生3名，其中2名已经取得硕士学位，1名在读。项目投入经费23万元，支出21.3297万元，各项支出基本与调整后预算相符。剩余经费1.6703万元，剩余经费计划用于本项目研究后续支出。