从内皮表面多糖蛋白复合物降解途径研究中药复苏合剂治疗内毒素诱导急性肺损伤大鼠肺血管渗漏的机制

The rate of incidence and mortality of acute lung injury is high,it is still the first death factor of non-cardiac intensive care patients in the worldwide.The lack of effective treatment for lung vascular leakage of acute lung injury is the main reason of no breakthrough of effect.The glycocalyx of the endothelial surface layer degradation by active heparanse can increase vascular permeability.Funded by Hall of province science and technology project of Sichuan，wo have confirmed that the traditional Chinese medicine FUSu agents can reduce lung vascular leakage.Based on the early foundation,under the guidance of the theory of " Wen Shenqian Yang" in the traditional Chinese medicine ,using endotoxin-induced septic shock as rat model,using the glycocalyx degradation by active heparanse path relating to lung vascular leakage,the laser scanning confocal microscope and electron microscope techenology and other molecular biology technique are used.For the first time,we verify the action of the glycocalyx degradation by active heparanse path in lung vascular leakage of acute lung injury，We further observe the changes of the key signal in this path of rat pulmonary vascular intervented by Fusu agent ,On one hand，we reveal the molecular mechanism of acute lung injury lung vascular leakage from the glycocalyx of the endothelial surface layer.On the other hand, we reveal the lung vasculer leakage molecular mechanism of Fusu agent treating the acute lung injury .

急性肺损伤的发生率和病死率均居高不下，仍然是世界范围内非心脏病重症监护患者的首位死亡因素，针对急性肺损伤时肺血管渗漏缺乏有效治法是目前治疗急性肺损伤疗效未取得突破的主要原因。乙酰肝素酶被激活后降解内皮表面多糖蛋白复合物，同时使粘附分子暴露于血管内皮表面，增加了血管通透性。本课题组在四川省科技厅项目等资助下，已证实中药复苏合剂可减少肺血管渗漏。本研究在前期基础上，在中医"温肾潜阳"理论指导下，以内毒素诱导急性肺损伤大鼠为模型，引入与肺血管通透性相关的乙酰肝素酶降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖途径，借助共聚焦激光显微镜及分子生物学技术等手段，首先验证该途径在急性肺损伤肺血管渗漏中的作用，进一步观察复苏合剂干预后大鼠的肺血管渗漏情况及该途径相关蛋白的表达变化，一方面从乙酰肝素酶降解内皮表面层角度揭示急性肺损伤肺血管渗漏的分子机制，另一方面揭示复苏合剂治疗急性肺损伤肺血管渗漏的分子机制。

急性肺损伤发生率和病死率居高不下，肺毛细血管渗漏是急性肺损伤发生的中心环节，本课题在前期研究基础上，针对乙酰肝素酶激活后降解血管内皮表面层这一血管通透性增加、毛细血管渗漏机制为切入点，以内毒素诱导的急性肺损伤大鼠为实验模型，首先验证乙酰肝素酶降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在内毒素诱导急性肺损伤肺毛细血管渗漏中的作用，再进一步予复苏合剂干预，观察药物对该过程的影响，以及对乙酰肝素酶活性的变化的调控。研究结果表明，复苏合剂能改善脓毒症诱导的急性肺损伤大鼠模型肺损伤程度，能明显降低肺泡灌洗液中TNF-α、IL-10等炎症因子水平，抑制炎症反应；能抑制乙酰肝素酶表达，从而减少硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的降解所致的内皮表面层损伤，同时对内皮表面粘附因子ICAM-1表达明显下调；在细胞层面研究显示，复苏合剂可以降低LPS处理所致的LDH泄漏、抑制caspase-3途径凋亡和坏死；通过对乙酰肝素抑制与过表达细胞模型的干预，复苏合剂对细胞保护作用的发挥与乙酰肝素调控密切相关。本研究验证了内毒素诱导急性肺损伤大鼠肺毛细血管渗漏机制与乙酰肝素酶介导的血管内皮屏障功能损伤相关，并在此基础上施加复苏合剂药物干预，证实了复苏合剂治疗内毒素诱导急性肺损伤毛细血管渗漏的分子机制，以及对基于乙酰肝素酶调控的LPS诱导的内皮细胞损伤的保护作用进行了探索研究，为解决急性肺损伤肺毛细血管渗漏病理机制难题提供了临床有效治疗方法与药物靶点，也为复苏合剂临床应用提供了实验依据，对提高脓毒症所致急性肺损伤临床疗效、降低死亡率具有重要现实意义。