VP22增强铜绿假单胞菌DNA疫苗免疫效力的评价

研究证实1型单纯疱疹病毒间层蛋白VP22具有细胞间转运功能的分子生物学特性。在此认识的基础上，我们推测VP22这一特性能提高抗原在细胞中的扩散和分布，从而增强铜绿假单胞菌DNA疫苗的免疫效力（迄今国内外尚未见相关报道）。为了证实这一假说，本课题拟以VP22-外膜蛋白F融合DNA疫苗和VP22-b型鞭毛蛋白融合DNA疫苗为研究对象，通过检测DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫水平、细胞免疫水平以及DNA疫苗对感染小鼠的免疫保护作用，以评价VP22是否增强铜绿假单胞菌外膜蛋白F DNA疫苗与b型鞭毛蛋白DNA疫苗的免疫效力。本课题为研发铜绿假单胞菌DNA疫苗提供了新的思路，并为进一步研发具有更好免疫效力的融合VP22的铜绿假单胞菌DNA疫苗奠定基础。

通过Seamless cloning的方式构建了VP22-外膜蛋白F融合DNA疫苗 pVAX1-VP22/OprF和pVAX1-OprF/VP22，以及VP22-B型鞭毛蛋白融合DNA疫苗pVAX1-FlaB/VP22；原核表达和纯化获得OprF蛋白与FlaB蛋白。以OprF融合蛋白DNA疫苗为研究对象的体液免疫实验结果表明：pVAX1-OprF/VP22、pVAX1-VP22/OprF DNA疫苗产生的抗体均能特异性识别OprF蛋白；pVAX1-OprF和pVAX1-VP22/OprF DNA疫苗体液免疫效力无差别；pVAX1-OprF/VP22 DNA疫苗体液免疫效力最强（P<0.05）。以OprF融合蛋白DNA疫苗为研究对象的细胞免疫实验结果表明：pVAX1-OprF和pVAX1-VP22/OprF DNA疫苗的抗原特异性脾淋巴细胞增殖以及分泌IFN-γ的效力没有差别；pVAX1-OprF/VP22 DNA疫苗的抗原特异性脾淋巴细胞增殖以及分泌IFN-γ的效力最强（P<0.05）。上述结果提示VP22羧基端与目标蛋白融合表达，其并不增强目标蛋白DNA疫苗的免疫效力；而VP22氨基端与目标蛋白融合表达，其可显著增强目标蛋白DNA疫苗的免疫效力。进一步以FlaB/VP22 DNA疫苗为研究对象的体液免疫实验结果表明：pVAX1-FlaB/VP22 DNA疫苗产生的抗体能特异性识别FlaB蛋白；且pVAX1-FlaB/VP22 DNA疫苗体液免疫效力比pVAX1-FlaB DNA疫苗更强（P<0.05）。以FlaB/ VP22 DNA疫苗为研究对象的细胞免疫实验结果表明：与pVAX1-FlaB DNA疫苗相比，pVAX1-FlaB/VP22 DNA疫苗的抗原特异性脾淋巴细胞增殖以及分泌IFN-γ的效力更强（P<0.05）。综上结果表明：VP22氨基端与目标蛋白的融合表达可显著增强铜绿假单胞菌OprF和FlaB DNA疫苗的免疫效力。本课题为研发铜绿假单胞菌疫苗提供了新的思路，并为进一步研发具有更好免疫效力的融合VP22的铜绿假单胞菌疫苗奠定了基础。