丹红注射液调控Akt-eNOS信号通路改善心肌缺血/再灌注损伤的药效物质研究

伴随着冠脉内溶栓和冠脉搭桥等治疗手段的广泛应用，心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤日益受到医药学家的高度关注。中医药对MI/R损伤的治疗发挥着重要作用，其中由丹参、红花组成的丹红注射液已在临床使用十余年，疗效确定，安全性高，年销售额超过17亿元，但其药效物质基础不清，药理机制不清，代谢途径不清，难以得到国际医药界的认可。本项目拟在课题组前期确认的与丹红注射液抗MI/R损伤作用机制相关的Akt-eNOS信号通路的研究基础上，利用课题组独创的药效差示血清色谱法，以与Akt-eNOS通路相关的信号分子为药效导示，筛选丹红注射液中的药效物质。为今后对其进行大品种改造进而开发成创新性I类化学药物提供研究理论和技术方法，并为筛选通过该机制发挥抗MI/R损伤的中药药效物质开创新思路。

冠心病严重威胁人类健康，伴随着冠脉内溶栓和搭桥等治疗手段的广泛应用，继之出现的心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）日益受到高度关注。中药对MI/RI的治疗发挥着重要作用，其中又以丹红注射液（DHI）的疗效最为确切。但是由于其药效物质、作用机制、代谢途径不清，难以得到国际认可。因此要阐明DHI作用机制、代谢途径等问题，确定其药效物质尤为关键。.本项目利用课题组首创的药效差示血清色谱法，在MI/RI大鼠和模拟缺血/再灌注损伤（SI/RI）的心肌细胞上，深入研究了DHI治疗MI/RI的药效物质及作用机制。根据DHI的全成分指纹图谱，分析了DHI中19个主要成分，以心肌酶、炎症因子等指标及Akt-eNOS通路相关信号分子的变化为药效导示，确定最大和最小药效时间点，通过差示比对筛选出DHI中变化最大的成分为羟基红花黄色素A（HSYA）、丹酚酸B（SalB）、丹参素（DSS）、原儿茶醛（PAl）和迷迭香酸。研究结果表明SalB、DSS、PAl均可减小MI/RI大鼠心梗面积，降低血清肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）水平，改善心肌组织形态，SalB可降低血清IL-1β，IL-6和TNF-α水平，提高心肌组织抗氧化酶活性。SYA、DSS、PAl可提高SI/RI心肌细胞存活率，降低细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）水平。机制研究发现SYA通过抗氧化，DSS通过增加Bcl-2/Bax比值，降低Caspase-3活性，从而抑制心肌细胞凋亡；SalB和PAl通过NF-κB信号通路抑制炎症反应。根据心梗面积、血清CK-MB、cTnI水平和心肌组织形态学等药效指标和进一步的机制研究确定了DHI中调控RISK信号通路，发挥抗炎、抗氧化、抗凋亡多靶点改善MI/RI的药效物质分别为HSYA、SalB及DSS。通过对DSS与HSYA配伍机制的研究发现，二者配伍可显著减小MI/RI大鼠心电图ST段抬高，改善心肌组织形态，并激活Akt/Nrf2/HO-1通路实现协同保护。通过三个剂量DSS在犬体内的药代动力学分析，得到主要药动学参数。.本项目采用课题组独创的药效差示血清色谱法，揭示DHI组方的合理性及改善MI/RI的可能药效物质及作用机制，为寻找中药方剂的药效物质提供新策略；系统阐明DHI药效物质间的相互作用及代谢规律，为利用现代研究手段揭示中药配伍的科学内涵提供参考。