ClC-3氯通道调控多发性骨髓瘤细胞周期及机制的研究

我们先前发现ClC-3氯通道影响cyclins/CDKIs平衡和Erk1/2，Akt磷酸化，提示ClC-3能作为较上游细胞周期促进因子调控细胞周期。预试验结果显示多发性骨髓瘤病人浆细胞ClC-3显著高表达，siRNA沉默ClC-3可抑制多发性骨髓瘤细胞增殖并导致肿瘤细胞周期G1/S阻滞。后续研究拟探讨ClC-3参与骨髓瘤细胞增殖的分子机制，试验利用酵母双杂交寻找与ClC-3结合且在细胞周期进程中起关键作用的靶分子，确定ClC-3序列上的功能位点，验证ClC-3通过该位点结合靶分子共同促进肿瘤细胞周期G1/S转换。试验将ClC-3高表达，ClC-3表达缺失，ClC-3功能位点突变的多发性骨髓瘤细胞系接种SCID小鼠，在体内观察ClC-3对多发性骨髓瘤细胞增殖和细胞周期的影响。研究将从氯通道这一新角度深入认识多发性骨髓瘤发病机理，为评估ClC-3氯通道可否作为治疗该病的新靶点提供依据。

本研究采用细胞培养、膜片钳、激光共聚焦、流式细胞仪和免疫印记，siRNA沉默等手段和在体和细胞水平的多发性骨髓瘤细胞上，首次发现：.1.ClC-3能促进在MM细胞增殖，沉默ClC-3能明显抑制MM细胞增殖，ClC-3能促进在MM细胞周期G1/S转换，沉默ClC3氯通道阻止细胞周期从G0/G1期进入S期，阻止DNA的合成, 沉默ClC-3抑制细胞周期调控蛋白cyclin D1和cyclinE表达，增加P21, P27表达。沉默ClC-3抑制ERK1/2的磷酸化，沉默ClC-3抑制Akt 308、473位点和GSK3β的ser 9位点磷酸化。说明ClC-3通过这些磷酸化信号通路影响细胞周期G1/S转换。.2. 多发性骨髓瘤病人来源的浆细胞中ClC-3的表达显著高于正常人来源的浆细胞。.3. Src蛋白酪氨酸激酶参与了容积调节性ClC-3氯通道的调节，Src蛋白酪氨酸激酶与ClC-3蛋白相互作用并磷酸化ClC-3蛋白的284，572酪氨酸位点可能是其重要的调节机制。.4. 在体水平验证ClC-3促进MM细胞增殖和细胞周期调控的理论，证实ClC-3是促进多发性骨髓瘤细胞恶性增殖和推动细胞周期进程的重要分子，从氯通道角度为开发治疗多发性骨髓瘤的药物提供实验依据。