microRNA196b调控COSMC表达在儿童IgA肾病发病中的作用研究

IgA nephropathy(IgAN) is one of the most common reason for end-stage renal failure. It’s pathogenesis is complex and unclear. The activity of C1β3Gal-T were reduced and lead to the formation of galactose-deficient IgA1(Gd-IgA1) in this disease. The reason of abnormal C1β3Gal-T is the decreased expression of COSMC. Our previous study had found that: COSMC was abnormally expressed in IgAN; hypermethylation was not the key point to the abnormally expression of COSMC ; the level of miR-196b were elevated in IgAN, and miR-196b target on COSMC. This study was designed to explore the mechanism of the pathogenesis of IgAN by clinical, cellular and animal researches. Our object is to find out that miR-196b regulates the expression of COSMC and affects the activity of C1β3Gal-T and the formation of Gd-IgA1. We consider the result will be very important for identifying the pathogenesis of IgAN and for the discovery of new target for the therapy of the disease

IgA肾病是儿童最常见的原发性肾小球疾病之一，其发病机制尚不完全清楚。已经证明核心ß1,3半乳糖基转移酶（C1β3GalT）失活致半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）形成是发病的关键所在，而C1β3GalT酶失活的原因可能是其特异性分子伴侣COSMC异常所致。我们前期研究发现，IgA肾病患儿Gd-IgA1水平增高而COSMC表达减少；同时58个microRNA表达发生了变化，其中COSMC基因表达与miR-196b相关。因此，miR-196b可能通过对COSMC的调控在IgA肾病发生中起重要作用。项目拟通过临床患者观察、体外细胞培养和动物实验，采用miR-196b转染技术探讨其对COSMC表达的调控作用以及对Gd-IgA1分子形成的影响，进而观察Gd-IgA1分子在肾脏沉积以及IgA肾病系膜增殖等肾损害发生过程中的作用。项目将为明确IgA肾病的发病机制和探索新的药物治疗靶点奠定基础。

IgA肾病是儿童最常见的原发性肾小球疾病之一，其发病机制尚不完全清楚。已知核心ß1,3半乳糖基转移酶（C1β3GalT）失活致半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）形成是发病的关键所在，而C1β3GalT酶失活的原因可能是其特异性分子伴侣COSMC异常所致。我们前期研究发现，IgA肾病患儿Gd-IgA1水平增高而COSMC表达减少；同时58个microRNA表达发生了变化，其中COSMC基因表达与miR-196b相关。因此，miR-196b可能通过对COSMC的调控在IgA肾病发生中起重要作用。本研究在前期工作基础上通过临床患者观察、体外细胞培养和动物实验，采用miR-196b转染技术探讨其对COSMC表达的调控作用以及对Gd-IgA1分子形成的影响，进而观察Gd-IgA1分子在肾脏沉积以及IgA肾病系膜增殖等肾损害发生过程中的作用。.通过第一部分临床研究发现，在儿童患者中，IgA肾病组与其他肾脏病对照组相比，血浆中COSMC(C1GALT1C1）表达水平有显著差异（p=0.005）;IgA肾病组与其他肾脏病对照组以及正常对照组相比，血浆中microRNA196b表达水平有显著差异（p=0.041，p=0.020）。进一步细胞学实验发现，用microRNA196bmimics转染细胞后检测COSMC 3’UTR表达量下降，提示microRNA196b对COSMC 3’UTR相对荧光定量有抑制作用，microRNA196b调控COSMC 表达。Western blot法检测蛋白水平microRNA196b对COSMC的影响：结果显示，与对照组相比，加入microRNA196b mimics后，COSMC表达水平显著下降，而二个对照组及内参表达无差异；加入microRNA196b inhibitor后，COSMC表达水平显著升高。动物实验结果提示，IgA肾病小鼠模型microRNA196b表达水平较正常对照组升高，应用AgomirmiR196b干预后，IgA肾病小鼠COSMC表达水平显著减低，病理损害加重；应用AntagomirmiR-196b干预后IgA肾病小鼠COSMC表达水平升高，肾脏病理损害减轻。. 综上，通过本研究我们发现miR-196b调控COSMC表达，并导致Gd-IgA1分子形成及在肾脏沉积，参与儿童IgA肾病发病。今后我们将进行更进一步的深入研究。