aPC通过介导YB-1磷酸化参与PLA2R相关性膜性肾病发病机制的研究

APC plays a renoprotcetive role in kidney diseases, although, little article reports the function and mechanism of aPC in IMN.The role of YB-1 in kidney diseases is controversy, and there is seldom literature about the relationship between YB-1 and IMN. Previously, we find that there is Y box in promoter of human and mouse PLA2R gene using UCSC database. Our previous experiment confirm that the expression of PLA2R is decreased in YB-1-/+ mouse, and the expression of PLA2R is increased compared with normal C57BL/6 mouse, which means YB-1 can bind to the promoter of PLA2R gene to facilitate the expression of PLA2R.Besides, PhosphoNETKinase Predictor suggests that ERK1/2 can induce YB-1 phospholation. Therefore, we hypothesized that aPC plays an inhibition role in transcription of PLA2R gene via phosphorylating YB-1 induced by ERK1/2. We will explore the mechanism from cell, tissue and animal model through Real-time PCR, Western blot and Lentivirus transfection et al. and provide the theoretical basis and experimental evidence for the prevention and treatment of PLA2R related IMN.

aPC具有肾脏保护作用，其在IMN中的作用未知。YB-1是核转录因子之一。前期运用UCSC基因库查找生物信息时发现，人及大鼠PLA2R基因启动子中均存在Y盒。我们预实验发现，与正常大鼠相比，PLA2R在YB-1-/+大鼠肾脏组织中表达量下降，在YB-1+/+大鼠肾脏组织中表达量上升。这说明YB-1可通过绑定基因启动子促进PLA2R转录。前期运用软件PhosphoNETKinase Predictor证实ERK1/2可介导YB-1磷酸化。因此，我们假设：在PLA2R相关性IMN时，aPC通过激活ERK1/2介导YB-1磷酸化，磷酸化的YB-1与基因启动子结合抑制PLA2R基因转录激活。我们将采用Real-time PCR、Western blot、慢病毒转染等手段分别从细胞、组织及整体动物水平等方面探讨aPC通过YB-1参与PLA2R相关性IMN发病机制，为IMN的防治提供理论基础。

特发性膜性肾病（Idiopathic membranous nephtopathy, IMN）是导致成年人终末期肾脏疾病的重要原因之一，其具体发病机制不明。大量研究证实M型磷脂酶A2受体（M-type phospholipase A2 receptor，PLA2R）是导致IMN发病的重要靶抗原，而关于调控PLA2R在IMN足细胞中表达作用机制研究较少。APC具有肾脏保护作用，其在IMN中的作用未知。本项目首先通过检测抗PLA2R1抗体阳性的IMN患者血清APC水平，探索APC与PLA2R1之间相关性。我们发现抗PLA2R1抗体阳性的IMN患者血清APC水平降低。通过酶激活血清(ZAS)诱导足细胞，我们成功构建了体外高表达PLA2R1的IMN足细胞模型。我们用不同浓度的APC作用于体外IMN足细胞模型后发现，APC减少了足细胞凋亡，并呈浓度依赖性，且APC降低了体外IMN足细胞模型中PLA2R1表达。其具体作用机制如何呢？通过进一步的实验，我们发现在体外IMN足细胞模型中，APC在降低PLA2R表达同时，促进了磷酸化的ERK1/2表达。因此，我们推测APC可能通过ERK1/2信号途径抑制PLA2R表达。根据前期预实验结果，YB-1具有PLA2R1结合位点，且ERK1/2可调控YB-1的磷酸化的修饰。因此，我们分离足细胞的细胞核与细胞质，通过分别检测胞质及胞核中YB-1表达量，我们证实磷酸化的ERK1/2可促进YB-1从细胞质转移至细胞核，抑制足细胞凋亡。通过荧光双素酶基因报告，我们证实YB-1确实可以与PLA2R1启动子结合，抑制PLA2R1表达。通过构建YB-1敲除及过表达细胞模型，及PLA2R1过表达细胞模型，我们证实APC通过促进ERK1/2磷酸化，导致YB-1入核增加，抑制PLA2R1表达，缓解了IMN进展。本研究首次证实APC通过ERK1/2/YB-1轴抑制PLA2R1表达，从而缓解IMN发病。也首次证实YB-1作为转录因子，参与了PLA2R1的表达调控。阐明了PLA2R相关性膜性肾病的发病新机制，为IMN的治疗提供了新的药物作用靶点。