TLRs信号传导通路负性调节因子基因重测序及与汉族人群严重脓毒症易感性的关联研究

Toll样受体(TLRs)信号传导通路持续激活介导的炎症介质过量生成与严重脓毒症发病密切相关。TLRs传导通路的负性调节因子调控炎症介质的过量生成，研究证实负性调节因子的表达异常参与了严重脓毒症的发病。我们前期对TLRs通路5个基因的SNPs与严重脓毒症的易感性进行了关联研究，发现负性调节因子－TOLLIP基因内含子区域SNP rs5743867影响基因表达且与严重脓毒症易感性有关。TLRs通路其它负性调节因子基因变异是否与严重脓毒症易感性有关，至今未见报道。本课题拟通过对TOLLIP和其它负性调节因子基因外显子、启动子、5'UTR和3'UTR测序，筛选标签SNPs，分析是否存在与rs5743867连锁的功能区域SNPs，同时对其它负性调节因子标签SNPs进行分型，筛查与严重脓毒发病相关的SNPs；最后对致病SNPs进行功能研究,阐明TLRs通路负性调节因子基因变异与严重脓毒症的相关性。

TLRs信号传导通路介导的炎症介质过量生成与严重脓毒症的发病相关。负性调控因子影响炎症介质的生成，其表达异常参与了严重脓毒症发病。本研究选择TLRs通路关键基因（TOLLIP、TNFAIP3、NOD2、 C5a、 SIGIRR、SOCS-1、RP105和 IRAK3）及与炎症反应密切相关的基因（TNF-α、TF和TFPI）tagSNPs进行分型，比较等位基因频率和基因型频率在健康对照组、脓毒症组和严重脓毒症组的分布情况，探讨基因的遗传变异是否与严重脓毒症患者的发病和预后相关。研究发现：①TNFAIP3基因的SNP-rs661561及由rs661561(G/T) 和rs610604 (T/G) 组成的单倍域与脓毒症诱导的ALI/ARDS发病有显著的相关性，等位基因rs661561 T对ALI/ARDS的发病具有保护作用；②NOD2是细胞内重要的模式识别受体，研究发现3个完全连锁的SNPs-rs2076753, rs2111235和rs3135499等位基因频率和基因型频率在严重脓毒症组、脓毒症组和健康对照组存在显著的统计学差异。rs3135499位于NOD2基因的3’UTR区域，严重脓毒症组患者等位基因C的频率明显高于脓毒症组和健康对照组。功能研究发现携带等位基因C的个体炎症介质的生成明显增加；③TNF是早期重要的炎症介质，与严重脓毒症的发病密切相关。课题组采用国内最大脓毒症样本对TNF-α基因10个位于功能区域的SNPs进行基因分型研究，发现TNF-α -308G/A多态性与严重脓毒症的易感性相关，携带等位基因A的个体易患严重脓毒症（P=0.00046，OR=1.92）。携带基因型AA+AG的个体在受到内毒素刺激后，炎症介质TNF-α的浓度明显高于携带基因型GG的个体；④TF和TFPI是严重脓毒症启动的关键因素。研究发现TF基因变异与严重脓毒症的预后相关：严重脓毒症存活组患者等位基因rs1361600G的分布频率明显高于死亡组患者（P=4.91*10-5,OR=0.48）。rs1361600影响TF mRNA的表达生成。携带rs1361600AA基因型个体TF-mRNA的表达水平明显高于携带GA+GG的个体（P=0.0012）。另外发现携带rs1361600AA基因型严重脓毒症患者血浆TF浓度明显高于携带GA+GG基因型的患者（P=0.02）。