中国黄淮麦区重要禾谷孢囊线虫群体致病型相关分子标记的建立

禾谷孢囊线虫病目前已成为中国小麦主产区生产上的重要病害，对小麦生产构成巨大的威胁。利用抗病品种是防治该病的最重要的措施，要合理利用抗病品种对禾谷孢囊线虫病进行有效防控，首先需要搞清楚病原线虫的相关信息，尤其是病原线虫的种类和致病型。传统的禾谷孢囊线虫致病型的鉴定主要是利用国际上通用的鉴别寄主，鉴定周期长，而且鉴定结果易受主客观因素的影响。本项目在前期工作的基础上，拟采用rDNA-ITS-RFLP、RAPD、AFLP和ISSR等技术建立黄淮麦区重要禾谷孢囊线虫群体不同致病型的特异性分子标记，探索禾谷孢囊线虫致病型鉴定的新途径，缩短致病型鉴定的时间。而且从线虫本身入手可避免外界因素对鉴定结果的影响，大大提高鉴定结果的准确性和可靠性，为抗孢囊线虫小麦品种的选育和小麦孢囊线虫病的防治提供理论依据。

本研究主要以黄淮麦区5个重要禾谷孢囊线虫致病型共9个线虫群体为对象进行RAPD和ISSR分析，另外在进行SCAR标记特异性验证时又增加了中国其他省份8个禾谷孢囊线虫群体。主要研究结果如下：.共筛选了RAPD随机引物331条，找到了4个燕麦孢囊线虫荥阳致病型群体的相关RAPD标记：引物S10、引物S43、引物S112、引物S170分别可以扩增出1条约750bp、1200bp、800bp、1300bp的特异性条带；1个燕麦孢囊线虫保定、商丘致病型群体相关的RAPD标记：引物S83可以扩增出1条约350bp的多态性片段；2个菲利普孢囊线虫许昌致病型群体相关的RAPD标记：引物S86、引物S178分别可以扩增出1条约550bp、1200bp的多态性片段；3个菲利普孢囊线虫淮阳、博爱致病型群体相关的RAPD标记：引物S48、引物S232、引物S278分别可以扩增出1条约600bp、550bp、1700bp的多态性片段。其中荥阳致病型群体的3个RAPD标记和许昌致病型群体的其中2个RAPD标记已成功转化为SCAR标记，对多态性片段进行割胶回收后克隆测序，引物S10扩增出的多态性片段大小为759bp，引物S43扩增出的多态性片段大小为1182bp，引物S112扩增出的多态性片段大小为857bp，引物S86扩增出的多态性片段大小为539bp，引物S178扩增出的多态性片段大小为1135bp。根据测序结果设计特异性引物，结果表明根据S10、S43、S112扩增的多态性片段设计的特异性引物进行扩增只有荥阳群体能够扩增出特异性条带，根据S86、S178扩增的多态性片段设计的特异性引物进行扩增只有许昌群体能够扩增出特异性条带，证明这5个SCAR标记具有特异性，可以用于荥阳群体和许昌致病型群体的分子检测。共筛选了57对ISSR引物，找到了燕麦孢囊线虫荥阳致病型群体3个ISSR标记，引物UBC810、UBC811、UBC813分别可以扩增出1条约1900bp、1400bp、1800bp的特异性条带。其中引物UBC810扩增出的特异性条带已成功转化成SCAR标记，测序结果显示片段大小为1757bp，设计特异性引物进行PCR扩增只有荥阳群体能够扩增出特异性条带，证明该SCAR标记具有特异性，可以用于荥阳致病型群体的分子检测。