基于免疫磁珠富集的荧光快速检测出土文物中痕迹蚕丝蛋白的方法研究

In order to seek for earlier silk evidence in the traces of silk or in the absence of the macroscopic morphology of silk, this project designed a silk fibroin monoclonal antibody and coupled it with magnetic beads to prepare immunomagnetic beads. The microfilament protein was enriched and purified by immunomagnetic beads. Combined with ELISA detection and immunofluorescence technique, the micro-marking detection system for silk artifacts based on immune technology was constructed. It provides a sensitive, specific, and rapid method for enrichment and identification method for silk traces and silk residues in ancient sites. This provides a new scientific evidence for studying the origin of silk and the road map for its communication.

为成功在丝织物痕迹或在丝绸宏观形态消失的情况下探寻更早的丝绸证据，本项目设计丝素蛋白单克隆抗体，并将其与磁珠偶联制备免疫磁珠，利用免疫磁珠对微量丝素蛋白进行富集提纯。再结合ELISA检测和免疫荧光技术构建基于免疫技术的丝绸文物微痕检测体系，为古遗址中丝织物印痕和已经化作无形的丝绸残留物提供一种敏感、特异、快捷的富集和辨识方法，为研究丝绸的起源和传播路线图提供新的科学证据。

丝绸是中华民族认同的文化标识，它承载着5000多年的中华文明与历史的积淀。作为中华文明重要的起源之一，丝绸究竟何时被发明至今仍未有定论。由于丝织品的主要成分是蛋白质，长时间的埋藏过程使早期墓葬中尸身和棺内丝绸大都已老化降解成小分子残留在土壤中，肉眼无法识别。为成功在丝织物痕迹或在丝绸宏观形态消失的情况下探寻更早的丝绸证据，本项目以丝素蛋白为完全抗原，制备SF-1、SF-2、SF-3、SF-4和SF-5五种特异性鼠抗丝素蛋白单克隆抗体，基于单抗构建了间接ELISA检测方法。其中SF-3单抗的检测限最低为4.65ng/mL，且可高效地将桑蚕丝从柞蚕丝和蓖麻蚕丝织物中鉴定出来。利用SF-3单抗与磁珠反应制备免疫磁珠，该免疫磁珠的最大抗原吸附能力为83ng/mg，对土壤、织物样品和矿化样品进行富集，结果显示免疫磁珠在复杂样品中对丝素蛋白有富集效果，可以显著提高间接ELISA的检测效率。利用生物素标记单抗，并进行单抗配对实验。SF-3与SF-1标记双抗夹心ELISA的检测灵敏度最高，利用此单抗配对构建免疫磁珠双抗夹心ELISA方法。在丝素蛋白浓度为10-104ng/mL，该曲线呈良好的线性关系，最低检出限为检测下限为5.12ng/mL。采用免疫磁珠双抗夹心ELISA对土样中的丝素蛋白进行回收率检测，丝素蛋白浓度在10-104区间内回收率可达70%以上，并成功在浙江长兴汉墓和苏家垄遗址88号墓土样中进行了应用。同时，采用荧光标记SF-1抗体构建免疫磁珠双抗夹心ELISA荧光显微技术，基于实验流程，初步组装了基于免疫磁珠的丝素蛋白荧光免疫检测试剂盒及使用方法，可为该技术的推广运用提供基础。该项目为早期遗址中微量残留物的鉴别提供了新的敏感、特异、快捷的富集和辨识方法，为研究丝绸的起源和传播路线图提供新的科学证据。