肺淋巴管肌瘤病患者外周血LAM细胞及游离DNA TSC2突变及其临床意义

Pulmonary lymphangioleiomyomatosis (LAM), a destructive and metastatic low-grade malignant tumor, is a rare cystic lung disease with somatic mutation on TSC2. The research of genetic characteristics of LAM requires surgical biopsy to obtain lung tissue, which is difficult to perform under many situations. Peripheral blood LAM cells and DNA would be a convenient and feasible approach to investigate the molecular biology of the disease. We aim to investigate the TSC2 gene mutation from peripheral circulating LAM cells and cell free DNA and their clinical significance in monitoring disease progress and treatment response. In the first part of the research, circulating LAM cells will be captured with a patented high-efficiency microfluidic chip. DNA will be harvested from captured LAM cells or plasma cell free DNA. Then loss of heterozygosity of TSC2 will be detected. In the second part of research, 40 cases of LAM will be systematically observed for 24 months. Clinical characteristics, rate of loss of pulmonary function, and treatment response to targeted therapy will be recorded. Then the relationship of TSC2 mutation and clinical significance will be analyzed.

肺淋巴管肌瘤病（LAM）是一种罕见的肺部囊性疾病，与体细胞TSC2突变有关，是一种具体破坏性和转移性的低度恶性肿瘤。由于疾病罕见并且肺部标本难以获得，LAM的分子遗传学研究受到严重限制。外周血有望成为一种简便易行的用于LAM分子遗传学研究的替代来源，为个体化治疗提供关键的指导依据。本课题的目标是研究外周血LAM细胞和游离DNA的TSC2突变，并分析其与临床表型、肺功能进展和针对TSC2突变的靶向治疗的关联性。研究分为两部分。第一部分是通过自主研发的能够高效分离游离肿瘤细胞的微流控芯片平台在体外捕获循环LAM细胞，同时直接分离患者的血浆游离DNA，选用杂合性丢失检测方法检查TSC2突变状况。第二部分将系统观察40例LAM患者24个月。分析TSC2突变（阳性、阴性以及突变程度）与临床表型、疾病进展（第一秒用力呼出气量的年下降率）和针对TSC2突变的靶向治疗（西罗莫司）治疗效果的关联性。

肺淋巴管平滑肌瘤病(LAM)是一个相对罕见的疾病，目前其诊断的确立对组织活检依赖日益降低，组织标本难以获得，分子遗传学研究受到限制。本研究旨在利用外周血探究LAM的TSC2基因突变，并分析其与临床表型之间的关系。在第一部分实验中，我们顺利地用微流控芯片捕获到了模拟血液中具有LAM细胞特征的目标细胞，并采用杂合性丢失的方法确认了目标细胞中存在TSC2基因突变，从而间接证实了微流控芯片捕获LAM细胞的可行性；同时，我们采用液体活检的方法，在LAM患者外周血cf-DNA中发现了TSC2基因突变。在进一步使用微流控芯片对LAM患者外周血进行捕获时，我们未发现LAM细胞的存在。这一结果提示将该技术直接应用于LAM患者外周血以捕获目标细胞时尚需更多的探索。在第二部分研究中，我们将LAM患者TSC2基因突变情况及尿液LAM细胞计数与临床资料进行对比，发现二者存在相关性。这有望为LAM患者的精确管理提供更多的线索。我们建立了LAM患者观察和治疗队列，目前仍在随访与观察患者TSC2突变与临床表型、治疗反应的关系。