利用合子胚再生途径和RNAi技术创制抗病毒无核葡萄新种质

根据近年来我国鲜食葡萄发展的趋势，无核葡萄越来越受到人们的青睐，通过品质优良的欧洲葡萄无核品种间杂交容易获得无核后代，但杂种后代更易感病令人堪忧。目前，葡萄卷叶病和扇叶病已成为危害葡萄的两种主要病毒病害，引起的产量损失最高可达80%，生产上尚无有效的化学防治办法，培育抗病品种无疑是一条根本出路。基于上述两种原因，本研究拟结合转基因技术，在对无核葡萄杂种胚进行离体培养的过程中，利用合子胚容易发生胚状体继而再生植株的特点，通过利用葡萄卷叶病病毒和扇叶病毒CP基因串联构建双价RNAi载体进行遗传转化，诱导植株产生转录后基因沉默、不翻译蛋白质，以期在获得无核性状的同时获得高效、安全的抗病毒特性，再进一步筛选获得有利用价值的抗病毒无核葡萄新材料。

近年来，无核葡萄越来越受到国内消费者的青睐，通过胚挽救途径，无核葡萄品种间杂交容易获得无核后代，但后代更易感病。同时，葡萄卷叶病和扇叶病严重危害我国葡萄生产，目前尚无有效的化学防治办法，培育抗病品种是一条根本出路。因此，培育抗病毒的无核葡萄新材料正是本项目的最终目标。（1）通过项目实施，我们利用对无核葡萄杂种胚进行离体胚挽救获得的合子胚，诱导形成了胚性愈伤组织和发生胚状体、继而再生植株，建立了比较稳定、高效的无核葡萄再生和遗传转化技术体系；（2）通过RT-PCR同源克隆获得了葡萄卷叶病毒和葡萄扇叶病毒CP基因保守片段，采用Gateway技术构建了3个RNAi植物表达载体；（3）并通过农杆菌介导法遗传转化烟草叶盘和葡萄体胚细胞成功获得了Kan和Hyg抗性植株，在进行分子生物学检测的基础上获得了一批有利用价值的转基因植物新材料；（4）并对转基因烟草的抗病性和转基因葡萄的无核性状进行了初步分析和早期预测。